熒光定量PCR檢測（Real-time PCR，QPCR）

熒光定量PCR檢測（Real-time PCR，QPCR）

服務介紹：熒光定量PCR是通過熒光染料(SYBR Green)或熒光標記的特異性的探針，對PCR產(chan) 物進行標記跟蹤，實時在線監控反應過程，結合相應的軟件可以對產(chan) 物進行分析，計算待測樣品模板的初始濃度。可以用於(yu) 檢測mRNA/lncRNA/circRNA的基因表達水平。每個(ge) 樣本默認做3個(ge) 複孔的技術重複。

　　實驗流程：

取材-RNA提取逆轉錄成cDNA-引物設計合成-QPCR擴增-數據分析-出報告

送樣運輸要求：

1. 樣品處理

a) 動物組織：常規組織100mg，脂肪組織，結締組織，纖維化組織適當增加。將組織-剪切成合適大小後（建議組織塊長寬高均不大於(yu) 0.5 cm），然後迅速完-全浸泡於(yu) 5～10倍體(ti) 積的RNAsolid^TM試劑中。（注意：已浸入RNAsolid^TM試劑中的組織經平衡一段時間後，可從(cong) 溶液中取出，切成更小的組織塊，再重新放回RNAsolid^TM試劑中；有些比較弱的液體(ti) 滲透性組織如骨頭等，不適合用RNAsolid^TM試劑進行RNA保護。）

b) 植物組織：新鮮的葉、果肉、種子最少100 mg。將嫩葉，嫩莖組織切成合適的大小（建議長寬高均不大於(yu) 0.5 cm）後，然後迅速完-全浸泡於(yu) 5～10倍體(ti) 積的RNAsolid^TM試劑中。（注意：某些植物組織天生具有的屏障，如葉子表麵的蠟層可阻礙RNAsolid^TM試劑的滲透，對於(yu) 此類組織，通常需破壞這些屏障層以允許溶液的浸透。）

c) 細胞等樣本：收集不少於(yu) 10^6個(ge) 細胞沉澱（用PBS清洗1-2次），幹冰運輸。

d) 酵母、細菌等樣本：離心棄上清，收集一定量的菌體(ti) 沉澱，幹冰運輸。

e)全血：最少1 mL新鮮血液EDTA抗凝管，幹冰運輸。

f)血清或血漿：最少1 mL，幹冰運輸。

g) 提取好的外泌體(ti) ：最少500ul，幹冰運輸。

h) RNA樣品： OD260/280為(wei) 1.8-2.0，濃度≥100 ng/μL，體(ti) 積≥20μL，幹冰運輸。

i)cDNA：cDNA原液≥20 μL，幹冰運輸。 

2. 樣品保存及運輸

加入有RNAsolid^TM試劑的樣本可在37℃保存1～2天，2天以後部分組織中的RNA會(hui) 開始降解。室溫（25℃）穩定保存1周，不會(hui) 有明顯的RNA降解發生。大部分樣品置於(yu) RNAsolid^TM試劑中，4℃條件下可穩定保存1個(ge) 月，不會(hui) 有明顯的RNA降解發生。長期存放可先將保存在RNAsolid^TM試劑中的樣本4℃浸透過夜，然後將RNAsolid^TM試劑吸出棄去，再將樣本放入-20℃或-80℃長期穩定保存3～5年。