ALP堿性磷酸酶染色（偶氮偶聯法）

ALP堿性磷酸酶染色（偶氮偶聯法）

服務介紹：

堿性磷酸酶是廣泛分布於(yu) 人體(ti) 肝髒、骨骼、腸、腎和胎盤等組織經肝髒向膽外排出的一種酶。這種酶能催化核酸分子脫掉5’磷酸基團，從(cong) 而使DNA或RNA片段的5’-P末端轉換成5’-OH末端。但它不是單一的酶，而是一組同工酶。已發現有 ALP1、ALP2、ALP3、ALP4、ALP5與(yu)  ALP6六種同工酶。其中第1、 2、6 種均來自肝髒，第3種來自骨細胞，第4種產(chan) 生於(yu) 胎盤及癌細胞，而第5種則來自小腸絨毛上皮與(yu) 成纖維細胞。正常的骨代謝是通過成骨細胞生長與(yu) 破骨細胞建立骨吸收而維持平衡。成骨細胞的標記酶是堿性磷酸酶（ALP），酶活性的變化是成骨細胞生理現象的重要標誌。在骨代謝研究領域被用作骨形成重要指標之一。

本實驗采用偶氮偶聯法來顯示堿性磷酸酶活性，其原理是在pH9.2～9.8的堿性條件下，細胞內(nei) 堿性磷酸酶可使萘酚AS-BI磷酸鹽水解，釋放出磷酸與(yu) 萘酚，後者與(yu) 偶聯重氮鹽生成有色（藍色）產(chan) 物，以此證明酶的定位。

實驗大體(ti) 流程：

骨組織PFA4℃固定保存一周內(nei) （24h-48h最佳）——骨組織用我司EDTA脫鈣液4℃低溫脫鈣——脫水浸蠟包埋石蠟切片——石蠟切片脫蠟至水——提前配製過濾的ALP染色液染色——烘箱烤片——中性樹膠封片。

結果判讀：

骨組織沿骨膜內(nei) 整齊排列的矮柱狀成骨細胞呈藍色，軟骨處呈藍色，骨小梁邊緣呈藍色，細胞核呈紅色。

其他軟組織含堿性磷酸酶的細胞呈藍色，細胞核呈紅色。

送樣運輸要求：

1、做ALP染色的組織需要用PFA 4℃固定保存運輸，固定一周內(nei) 脫水包埋切片染色。室溫固定數小時就會(hui) 影響酶活，4℃固定超過一周也會(hui) 影響酶活，導致陽性減弱甚至丟(diu) 失。

2、染ALP的骨組織需要使用我司EDTA脫鈣液4℃低溫脫鈣。其他脫鈣液脫鈣的組織，不保證染色結果。用酸性脫鈣液脫鈣的骨組織，酶失活陽性丟(diu) 失。建議在我司進行骨組織的全套脫鈣製片和染色。

3、不脫鈣骨組織前期樣本製片處理方式對ALP酶活影響較大，不脫鈣骨組織切片和切磨片目前不建議做此染色。

ALP堿性磷酸酶染色（偶氮偶聯法）