伴刀豆球蛋白A瓊脂糖凝膠FF

伴刀豆球蛋白A瓊脂糖凝膠FF

ConA NUPharose FF 

產(chan) 品介紹

ConANUPharose FF 是將刀豆蛋白A(ConcanavalinA，簡稱 ConA)鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的生物親(qin) 和層析分離介質，主要用於(yu) 各種帶甘-露醇及葡萄糖殘基的糖蛋白(包括糖蛋白病毒)、多糖和糖脂的分離和純化。ConA 是從(cong) 刀豆中提取出來的一種四聚體(ti) 金屬蛋白，是凝集素的一種，在 Mn?和 Ca?存在的情況下，可結合 α-D-吡喃甘露糖基、a-D-吡喃葡萄糖基和具有 C-3、C-4 或 C-6 羥基空間相關(guan) 殘基的分子。

ConA NUPharose FF 的應用領域還包括酶-抗體(ti) 偶聯物的純化、IgM 的純化、洗滌劑溶解的膜中細胞表麵糖蛋白的分離純化、膜囊泡的分離以及含碳水化合物物質組成變化的研究等。

1色譜柱裝填

(1)所有需要用到的材料的溫度要與(yu) 色譜操作的溫度一樣，液體(ti) 做脫氣處理。

(2)填料用量計算:通過沉降定量填料體(ti) 積，需要的沉降填料體(ti) 積=柱體(ti) 積X壓縮比(也稱壓縮因子)。沉降體(ti) 積是指填料在20%乙醇保存液中自然沉降讀取的穩定體(ti) 積。ConANUPharose FF的壓縮比為(wei) 1.15。為(wei) 使達到裝柱比，可通過柱頭下壓的方法，也可以通過高流速壓柱。

以下闡述與(yu) 層析係統連接時，填料的色譜柱裝填方法。

(3)填料清洗:將填料懸液充分搖勻後量取相應體(ti) 積，抽濾除去液體(ti) ，並用約3倍填料體(ti) 積的純化水洗滌，重複3次，以除去保存液。

(4)裝柱填料懸液準備:將填料轉移到適當的容器中，加入適量的裝柱液，製成50~75 v%的裝柱填料懸液，使用前攪勻。

(5)裝填前準備:在清洗幹淨的層析柱下端加入裝柱液，以除去下墊片及層析柱下端的空氣，在柱內(nei) 保留少量的蒸餾水，擰緊下堵頭，調整柱子使其垂直於(yu) 地麵。

(6)裝填:將攪勻後的填料懸液一次性緩慢倒入層析柱內(nei) (必要時使用裝柱器)，為(wei) 避免引入氣泡，應使之沿層析柱內(nei) 壁自然流下。將所有填料加入後，用裝柱液將裝柱器加滿，擰緊裝柱器上蓋，將柱子與(yu) 層析係統連接。

(7)壓柱:使柱內(nei) 填料自然沉降(或 10~20cm/h的低流速下沉降)，待填料沉降完-全後(填料與(yu) 液體(ti) 的界麵清晰)，去除裝柱器，裝上上柱頭，並將柱頭下降至界麵處;通過高流速(推薦流速見下表，注意柱壓不超過0.3MPa)，繼續壓柱至界麵清晰穩定，標記界麵穩定時的柱高。停泵，打開柱頭上的閥門/堵頭，關(guan) 閉柱底的閥門/堵頭，下壓柱頭至標記位置下方與(yu) 壓縮比對應的位置，旋緊柱頭，裝柱完成。裝柱完成後，需用高流速平衡柱內(nei) 的填料。

伴刀豆球蛋白A瓊脂糖凝膠FF