信帆提供：IP類實驗代測服務

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免疫共沉澱(Co-IP蛋白與(yu) 蛋白)

免疫共沉澱(Co-Immunoprecipitation)是以抗體(ti) 和抗原之間的專(zhuan) 一性作用為(wei) 基礎的用於(yu) 研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩(liang) 種蛋白質在完整細胞內(nei) 生理性相互作用的有效方法。當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內(nei) 存在的許多蛋白質-蛋白質間的相互作用被保留了下來。當用預先固化在agarose，beads.上的蛋白質A的抗體(ti) 免疫沉澱A蛋白,那麽(me) 與(yu) A蛋白在體(ti) 內(nei) 結合的蛋白質B也能一起沉澱下來。再通過蛋白變性分離，對B蛋白進行檢測，進而證明兩(liang) 者間的相互作用。這種方法得到的目的蛋白是在細胞內(nei) 與(yu) 興(xing) 趣蛋白天然結合的，符合體(ti) 內(nei) 實際情況，得到的結果可信度高。這種方法常用於(yu) 測定兩(liang) 種目標蛋白質是否在體(ti) 內(nei) 結合;也可用於(yu) 確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔。

CHIP實驗(DNA-蛋白相互作用)

染色質免疫沉澱技術的原理是:在生理狀態下把細胞內(nei) 的DNA與(yu) 蛋白質交聯在一起,通過超聲或酶處理將染色質切為(wei) 小片段後,利用抗原抗體(ti) 的特異性識別反應，將與(yu) 目的蛋白相結合的DNA片段沉澱下來。染色質免疫沉澱技術一般包括細胞固定，染色質斷裂，染色質免疫沉澱，交聯反應的逆轉，DNA 的純化，以及DNA的鑒定。因為(wei) ChIP實驗涉及的步驟多，結果的重複性較低，所以對ChIP實驗過程的每一步都應設計相應的對照，而且對結果的分析也需要有一定的經驗。對於(yu) 剛剛開始使用ChIP技術的研究人員來說，使用成熟的商品化試劑盒和相關(guan) 的技術服務會(hui) 達到事半功倍的效果。

RIP實驗基本原理:

1.用抗體(ti) 或表位標記物捕獲細胞核內(nei) 或細胞質中內(nei) 源性的RNA結合蛋白。

2.防止非特異性的RNA的結合。

3.免疫沉澱把RNA結合蛋白及其結合的RNA-起分離出來。

4.結合的RNA序列通過mi scroarrax(RIP-Chip),定量RT-PCR或高通量測序(RIP-Seq)方法來鑒定。

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