蛋白G瓊脂糖凝膠

蛋白G瓊脂糖凝膠

英文名稱：Protein G Berpharose FF

1.產(chan) 品介紹

鏈球菌G蛋白（Streptococcus Protein G，SPG）是G、C型鏈球菌細胞壁中的一種蛋白質，能特異性地同免疫球蛋白IgG分子的Fc段結合而不影響其Fab段與(yu) 抗原分子結合的能力，其親(qin) 和填料可以用於(yu) 從(cong) 血清、腹水、組織培養(yang) 物等上清中結合吸附並純化免疫球蛋白（抗體(ti) ）。

2.規格

1ml（預裝柱）、5ml（預裝柱）、10ml（預裝柱）、25ml、100ml、500ml、1L純化流程

應用舉(ju) 例：

結合緩衝(chong) 液：20mM磷酸緩衝(chong) 液、150mMNaCl、pH7.0

洗脫緩衝(chong) 液：0.1M甘-氨酸，PH3.0或0.1M檸檬酸緩衝(chong) 液，pH 4.0

中和緩衝(chong) 液：1 M Tris-HCl，pH 8.5

1) 1ml重組蛋白G瓊脂糖凝膠預填柱，用5-10個(ge) 柱床體(ti) 積的蒸餾水洗去保存液。

2)用結合緩衝(chong) 液平衡5-10個(ge) 柱床體(ti) 積。

3)將5ml人多抗血清用結合緩衝(chong) 液稀釋至50ml，0.45μm濾膜過濾上樣。

4)用結合緩衝(chong) 液平衡5-10個(ge) 柱床體(ti) 積至基線。

5)用洗脫緩衝(chong) 液洗脫抗體(ti) ，收集洗脫峰，並用中和緩衝(chong) 液調節其pH至中性。

6)每次使用後依次使用3個(ge) 柱體(ti) 積的結合緩衝(chong) 液，5個(ge) 柱體(ti) 積的去離子水，5個(ge) 柱體(ti) 積的20%的乙醇平衡保存，防止填料被細菌汙染。

7) SDS-PAGE電泳分析。

 6.注意事項：

1)樣品洗脫後一般pH很低，應立刻用堿性中和緩衝(chong) 液（如1MTris-HCl，pH8.5）將收集到的抗體(ti) 溶液中和到中性，或在收集容器中事先裝5-10%、pH7.5的緩衝(chong) 液（如1MTris-HCl或1M磷酸緩衝(chong) 液），以利於(yu) 維持抗體(ti) 的生物活性，避免抗體(ti) 失活。

2)使用時保證柱子和緩衝(chong) 液的溫度一致，避免柱床內(nei) 產(chan) 生氣泡，影響純化效果。

3)填料再生清洗：隨著一些變性物質的沉澱和蛋白的聚集，往往造成流速和結合載量下降，嚴(yan) 重影響純化效果，這時需要對填料進行再生清洗（如下步驟）

去除沉澱或變性物質：用2倍柱體(ti) 積的6M鹽酸胍溶液進行清洗，然後立即用5倍柱體(ti) 積的PBS, pH 7.4清洗。

去除疏水性吸附造成的非特異性吸附物質：用3-4倍柱體(ti) 積的70%乙醇或2倍柱體(ti) 積的1% Triton™X-100清洗，然後然後立即用5倍柱體(ti) 積的PBS, pH 7.4清洗

4)本產(chan) 品保存條件：20%乙醇，4~8℃。