鎳瓊脂糖凝膠 Ni(NTA)

鎳瓊脂糖凝膠 Ni(NTA)

英文名稱：Ni Berpharose FF-NTA

貨號：B2776

1.      產(chan) 品介紹

鎳-瓊脂糖凝膠FF(NTA)以瓊脂糖微球為(wei) 基質，活化偶聯次氮基三乙酸（NTA），之後螯合Ni2+。鎳-瓊脂糖凝膠FF(NTA)主要用於(yu) 分離能被金屬離子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白及帶 His標簽的重組蛋白。 

鎳 NTA瓊脂糖凝膠 FF具特異性好，螯合鎳更穩定，不易脫落，能耐受一定強度的還原劑，物理和化學穩定性好。

2.規格

1ml（預裝柱）、5ml（預裝柱）、10ml（預裝柱）、20ml、100ml、500ml

3.產(chan) 品性能

性能

指標

基質

6%瓊脂糖微球

配基

Ni2+

載量

≥40mg His標簽蛋白/ml

粒徑

45-165μm

建議流速

50-300 cm/h

耐壓

0.3MPa

工作溫度

4-40℃

pH穩定範圍

3-10

儲(chu) 存緩衝(chong) 液

20%乙醇

儲(chu) 存溫度

4-8℃

4.純化流程

①平衡

鎳-瓊脂糖凝膠FF柱用2-5個(ge) 柱體(ti) 積的初始緩衝(chong) 溶液進行平衡。

建議流速為(wei) 100 cm/h。

②上樣

（1）樣品一般溶解於(yu) pH6-8的初始緩衝(chong) 液中。提高上樣緩衝(chong) 液的pH值可以增大載量。

（2）常用緩衝(chong) 液有10-100 mM磷酸鈉緩衝(chong) 液、20-200 mM Tris-HCl緩衝(chong) 液等。

（3）緩衝(chong) 液中一般要加入0.15-0.5 M的NaCl以消除離子交換作用。

（4）初次使用鎳-瓊脂糖凝膠FF時，推薦使用50 mM PBS（50 mM NaH2PO4、0.3 M NaCl、pH 8.0）作為(wei) 初始緩衝(chong) 液。

③洗脫

（1）增加咪唑濃度進行洗脫是鎳-瓊脂糖凝膠FF最-常-用的洗脫方法。

（2）咪唑為(wei) 堿性，相應緩衝(chong) 液配製後需要用HCl調節pH值。

（3）初次使用鎳-瓊脂糖凝膠FF時，如不確定洗脫需要的咪唑濃度，推薦在初始緩衝(chong) 液中分別加入10 mM、20 mM、50 mM、100 mM、200 mM、500 mM咪唑，濃度從(cong) 低

到高分別洗脫和收集重組蛋白，之後通過SDS-PAGE電泳等方法鑒定洗脫結果。

（4）有條件的可以進行咪唑梯度線性洗脫以確定較佳的洗脫條件。

洗脫方法：

（1）降低pH洗脫：大多數蛋白在pH4-6會(hui) 被洗脫下來（也可以在pH 3~4），緩衝(chong) 液可以是醋酸鈉、檸檬酸和磷酸鹽緩衝(chong) 體(ti) 係。

（2）競爭(zheng) 性洗脫：線性增加或一步增加同金屬離子有親(qin) 和力的競爭(zheng) 物質的濃度（如0-0.5M咪唑、0-50 mM組-氨酸、0-2M NH4Cl）。梯度洗脫最好在起始緩衝(chong) 液的恒定pH值下進行。

 5.在位清洗

（1）去除因離子交換作用吸附的蛋白：使用1.5M NaCl溶液接觸時間為(wei) 10-15分鍾清洗，然後，再使用去離子水清洗10個(ge) 柱體(ti) 積。

（2）去除強疏水性蛋白和脂質等：通過使用30%異丙醇清洗5-10個(ge) 柱體(ti) 積，接觸時間為(wei) 15-20分鍾可以去除此類汙染物。

然後，再使用10倍柱體(ti) 積的去離子水清洗。也可以選擇使用含有去汙劑的酸性或堿性溶液， 清洗填料2倍柱體(ti) 積。例如，含有0.1–0.5%  非離子去汙劑的0.1 M  醋酸溶液，接觸時間 為(wei) 1–2  小時。去汙劑處理後，需要使用70%的乙醇清洗5個(ge) 柱體(ti) 積，以徹-底去除去汙劑。 最後使用10倍柱體(ti) 積的去離子水清洗。

5.注意事項：

1)使用時保證柱子和緩衝(chong) 液的溫度一致，避免柱床內(nei) 產(chan) 生氣泡，影響純化效果。

2)本產(chan) 品保存條件為(wei) 20%乙醇，4-8℃。

3) 2-25℃，常壓，避光運輸。

4）僅(jin) 供科研實驗使用。

鎳瓊脂糖凝膠 Ni(NTA)