全功能免疫印跡（WB）實驗代測

全功能免疫印跡（WB）實驗代測

全功能免疫印跡（WB）簡介：

免疫印跡（immunoblotting）又稱蛋白質印跡（Western blotting），是根據抗原抗體(ti) 的特異性結合檢測複雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發展起來的一種新的免疫生化技術。由於(yu) 免疫印跡具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現已成為(wei) 蛋白分析的一種常規技術。免疫印跡常用於(yu) 鑒定某種蛋白，並能對蛋白進行定性和半定量分析。結合化學發光檢測，可以同時比較多個(ge) 樣品同種蛋白的表達量差異。

全功能免疫印跡（WB） 原理：

通過SDS-PAGE凝膠將細胞或生物樣品內(nei) 的蛋白按照蛋白分子量從(cong) 大到小規律分離開。經過PAGE 分離的蛋白質樣品,轉移到固相載體(ti) (例如硝酸纖維素薄膜或PVDF膜).上,固相載體(ti) 以非共價(jia) 鍵形式吸附蛋白質,且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體(ti) 上的蛋白質或多肽作為(wei) 抗原,與(yu) 對應的抗體(ti) 起免疫反應,再與(yu) 酶或同位素標記的第二抗體(ti) 起反應(目前主要用HRP標記的第二抗體(ti) ) , 經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分(目前主要使用魯米諾和二抗中的HRP 反應發出熒光,通過儀(yi) 器或者膠片顯色)。該技術廣泛應用於(yu) 檢測蛋白水平的表達。

全功能免疫印跡實驗說明：

1、客戶需提供新鮮冰凍組織/細胞/血漿/外泌體(ti) /其他體(ti) 液及一抗)

2、每張膜（1-8個(ge) 樣品，一個(ge) 抗體(ti) ）

全功能免疫印跡（WB）實驗操作流程：

1、細胞及組織蛋白質抽提；

2、蛋白質定量；

3、變性聚丙烯酰胺不連續凝膠電泳(SDS-PAGE)；

4、蛋白質轉膜；

5、膜的封閉；

6、一抗、二抗孵育；

7、結果檢測：化學發光法檢測，X 膠片曝光顯影；

8、數據分析；

全功能免疫印跡（WB）實驗代測