HE染色實驗代測

HE染色實驗代測

蘇木精-伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，簡稱HE染色法 ，石蠟切片技術裏常用的染色法之一 。蘇木精染液為(wei) 堿性 ，主要使細胞核內(nei) 的染色質與(yu) 胞質內(nei) 的核酸著紫藍色 ；伊紅為(wei) 酸性染料 ，主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色 。

HE染色使用說明:

1、細胞可做HE染色，貼壁細胞做爬片後染色，懸浮細胞做滴片後染色。

2、拍照倍數分100倍，200倍，400倍。正常情況下拍照是200倍3張，400倍3張。

3、全景掃描可看任意倍數。

HE染色實驗步驟

1、樣本組織固定與(yu) 切片：首先將組織樣本進行常規的石蠟包埋。在模具中加入液態石蠟，將待包埋的組織樣本放入石蠟中，確保組織位置規整。補充少許液態的石蠟後，進行降溫冷凍，使石蠟變為(wei) 固態達到組織固定的效果，然後使用石蠟切片機進行切片，厚度在４-８um左右。將切完後的組織切片放入載玻片上使用40℃溫水浸泡使組織充分伸展。

2、組織樣本脫蠟：將待測組織樣本切片放於(yu) 二甲苯中，充分浸泡10min，浸泡完後更換二甲苯繼續浸泡10min，目的是使用二甲苯將切片中的石蠟溶解，這樣可以在進行染液染色的時候，染液可以充分進入組織種，同時，二甲苯還可以起到透明的作用，使切片更容易觀察。

3、組織樣本水化：將浸泡過二甲苯的待測組織樣本先放入無水乙醇中浸泡5min，使脫蠟時用的二甲苯可以被洗脫出去，使水可以進入組織中；再依次置於(yu) 95%、85%、70%乙醇中各浸泡５min以達到充分水化的效果。

4、組織切片蘇木-素染色、分化與(yu) 反藍：將水化後的組織樣本的切片使用PBS溶液浸泡清洗，每次浸泡５min，總共清洗３次。之後用移液槍吸取已經預先配製好的蘇木-素染色液，每個(ge) 組織切片滴加100ul，充分染色10min。染色完畢後使用蒸餾水洗去多餘(yu) 的蘇木-素染色液。然後再使用1%的鹽酸乙醇進行分化，使細胞核中結合過多的染液和細胞漿中的多餘(yu) 的染液被除去。分化完成後，再用雙蒸水將組織切片衝(chong) 洗幹淨。為(wei) 了使蘇木-素染藍色，使用弱堿性的促藍液加入組織切片中，讓細胞核染藍色。反藍結束後先用清水進行清洗，再用雙蒸水將組織切片衝(chong) 洗幹淨。

5、組織切片伊紅染色與(yu) 脫水：向上一步驟的組織樣本切片中加入伊紅染液，並使組織可以充分染色3min，染色完畢後，再將組織切片進行梯度脫水，分別使用濃度為(wei) 80%、95%以及無水乙醇進行操作。80%的乙醇脫水5s，95%乙醇脫水2min，無水乙醇脫水2min。

6、組織樣本切片風幹封片：將脫水後的組織樣本切片使用二甲苯浸泡２次，每次持續４min，然後將組織樣本切片幹，並使用中性樹膠封片。

7、最後在顯微鏡下觀察並拍照。

HE染色實驗代測