免疫熒光實驗代測服務

免疫熒光實驗代測服務

兔疫熒光技術是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。它是根據抗原抗體(ti) 反應的原理，先將已知的抗原或抗體(ti) 標記上熒光基團，再用這種熒光抗體(ti) (或抗原)作為(wei) 探針檢查細胞或組織內(nei) 的相應抗原(或抗體(ti) )。利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在的細胞或組織,從(cong) 而確定抗原或抗體(ti) 的性質和定位,以及利用定量技術(比如流式細胞儀(yi) )測定含量。

免疫熒光實驗說明：

1、確認要做的是單標還是雙標.

2、免疫熒光拍照免費。

3、免疫熒光要做預實驗。

4、全景掃描可看任意倍數。

冰凍切片熒光tunel+免疫熒光雙標實驗步驟

1、 冰凍切片固定：冰凍切片從(cong) 冰箱拿出來複溫，晾幹水分，冷丙酮固定10min，待丙酮*幹後於(yu) PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。

2、 修複：切片稍甩幹後用組化筆在組織周圍畫圈（防止液體(ti) 流走），在圈內(nei) 滴加蛋白酶K工作液（蛋白酶K儲(chu) 存液用PBS 1:9稀釋）覆蓋組織，37度溫箱孵育30min。將玻片置於(yu) PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。

3、 破膜：切片稍甩幹後在圈內(nei) 滴加破膜工作液覆蓋組織，常溫下孵育20min，將玻片置於(yu) PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。

4、 加試劑1,2：按片子數量和組織大小取tunel試劑盒內(nei) 適量試劑1 (TdT) 和試劑2(dUTP)按2:29混合（試劑1,2為(wei) 現配現用），加到圈內(nei) 覆蓋組織，切片平放於(yu) 濕盒內(nei) ，37℃恒溫孵育2小時，濕盒內(nei) 加少量水保持濕度。

5、 BSA封閉:將玻片置於(yu) PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min，在圈內(nei) 滴加用3%BSA均勻覆蓋組織，室溫封閉30min。

6、 加一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放於(yu) 濕盒內(nei) 4°C孵育過夜。（濕盒內(nei) 加少量水防止抗體(ti) 蒸發）

7、 加二抗：玻片置於(yu) PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩幹後在圈內(nei) 滴加與(yu) 一抗相應種屬的二抗覆蓋組織，避光室溫孵育50min。

8、 DAPI複染細胞核：切片用PBS（PH7.4）洗滌3次，每次5min。去除PBS後在圈內(nei) 滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min。

9、封片：玻片置於(yu) PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩幹後用抗熒光淬滅封片劑封片。

10、 鏡檢拍照：切片於(yu) 尼康倒置熒光顯微鏡下觀察並采集圖像。（紫外激發波長330-380nm，發射波長420nm；FITC綠光激發波長465-495nm，發射波長515-555 nm；CY3紅光激發波長510-560，發射波長590nm）

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