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產品分類信帆生物提供:凝膠遷移(EMSA)檢測服務服務介紹:EMSA也稱為(wei) 凝膠遷移實驗或凝膠阻滯實驗,是一種用於(yu) 研究蛋白質與(yu) 核酸(DNA或RNA)相互作用的分子生物學技術。通過該實驗,可以檢測蛋白質是否與(yu) 特定的核酸序列結合,並分析結合的特異性、親(qin) 和力等。
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信帆生物提供:凝膠遷移(EMSA)檢測服務
服務介紹:EMSA也稱為(wei) 凝膠遷移實驗或凝膠阻滯實驗,是一種用於(yu) 研究蛋白質與(yu) 核酸(DNA或RNA)相互作用的分子生物學技術。通過該實驗,可以檢測蛋白質是否與(yu) 特定的核酸序列結合,並分析結合的特異性、親(qin) 和力等。
檢測原理:
EMSA基於(yu) 核酸-蛋白質複合物在電場中的遷移率與(yu) 未結合核酸的蛋白質或核酸單體(ti) 不同的原理。當特定的DNA或RNA片段(通常稱為(wei) 探針)與(yu) 待測的蛋白質樣品混合並孵育時,如果蛋白質能夠與(yu) 探針結合,就會(hui) 形成核酸-蛋白質複合物。這種複合物由於(yu) 分子量較大,在電場中的遷移速度會(hui) 比未結合的核酸或蛋白質慢。通過比較電泳後形成的條帶位置,可以判斷蛋白質是否與(yu) 核酸結合,以及結合的程度。
實驗步驟:
通常將純化的蛋白和細胞粗提液和32P同位素標記的DNA或RNA探針一同保溫,在非變性的聚丙烯凝膠電泳上,分離複合物和非結合的探針。DNA-複合物或RNA-複合物比非結合的探針移動得慢。同位素標記的探針依研究的結合蛋白的不同,可是雙鏈或者是單鏈。當檢測 如轉錄調控因子一類的DNA結合蛋白,可用純化蛋白,部分純化蛋白,或核細胞抽提液。在檢測RNA結合蛋白時,依據目的RNA結合蛋白的位置,可用純化或部分純化的蛋白,也可用核或胞質細胞抽提液。競爭(zheng) 實驗中采用含蛋白結合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段(特異), 和其它非相關(guan) 的片段(非特異),來確定DNA或RNA結合蛋白的特異性。在競爭(zheng) 的特異和非特異片段的存在下,依據複合物的特點和強度來確定特異結合。
注意事項:
1、探針設計:探針的長度、序列和標記方法都需要仔細考慮,以確保實驗結果的準確性和可靠性。
2、實驗條件:實驗條件(如溫度、pH值、離子強度等)對實驗結果有很大影響,需要嚴(yan) 格控製。
3、結果分析:在分析結果時,需要注意區分非特異性結合和特異性結合,以及考慮可能的競爭(zheng) 性和抑製作用。
僅(jin) 供科研實驗用,不做其他用途!