彗星實驗，單細胞凝膠電泳實驗檢測服務

信帆生物提供：彗星實驗，單細胞凝膠電泳實驗檢測服務

服務介紹：彗星實驗（Comet Assay），也稱為(wei) 單細胞凝膠電泳實驗（Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE），是一種用於(yu) 檢測細胞DNA損傷(shang) 的分子生物學技術。該實驗因其在顯微鏡下觀察到的DNA遷移圖案形似彗星而得名。彗星實驗廣泛應用於(yu) 毒理學、環境科學、放射生物學和癌症研究等領域，用於(yu) 評估化學物質、輻射或其他因素對DNA的損傷(shang) 。
檢測原理：
當細胞受到外部因素（如輻射、重金屬暴露、化學物質等）影響時，細胞內(nei) 的DNA可能出現單鏈或雙鏈斷裂。在中性或堿性條件下，細胞經過裂解、解旋和電泳等步驟後，損傷(shang) 的DNA斷鏈及片段會(hui) 離開核DNA向陽極移動，形成彗星狀的圖像。DNA受損越嚴(yan) 重，產(chan) 生的斷片越多且片段越小，電泳時遷移的DNA量也就越大，遷移距離越長。在熒光顯微鏡下，可以觀察到尾長增加、尾部熒光強度增強。在一定條件下，DNA遷移距離（彗星尾長）和DNA含量（熒光強度）分布與(yu) DNA損傷(shang) 程度呈線性相關(guan) 。
實驗步驟：
1、單細胞懸液製備：將細胞調整為(wei) 適當的濃度，用於(yu) 後續的製膠步驟。
2、製膠：在載玻片上製備三層膠，第一層為(wei) 正常熔點瓊脂糖，用於(yu) 使第二層平整和附著緊密；第二層為(wei) 含有細胞的低熔點瓊脂糖，用於(yu) 固定細胞；第三層為(wei) 低熔點瓊脂糖，對第二層細胞起保護作用。
3、細胞裂解：將載玻片浸入細胞裂解液中，溶解細胞膜及核膜，除去蛋白質、RNA等，僅(jin) 存留核骨架。
4、DNA堿解旋：將載玻片置於(yu) 堿性電泳緩衝(chong) 液中，使DNA在堿性條件下解螺旋形成單鏈DNA，並使DNA斷鏈在電泳場中易於(yu) 遷移。
5、單細胞電泳：在適當的電壓和電流條件下進行電泳，使損傷(shang) 的DNA斷鏈及片段向陽極移動。
6、中和與(yu) 染色：電泳完畢後，用中和液處理載玻片，然後用熒光染料（如溴化乙錠）對DNA進行染色。
7、鏡檢和圖像分析：在熒光顯微鏡下觀察並拍照電泳圖譜，利用圖像分析軟件對彗星圖像進行指標分析，如彗星全長、尾長、尾矩和Olive尾距等。
注意事項：
1、細胞活性：確保細胞在處理過程中保持活性，避免人為(wei) 損傷(shang) 。
2、實驗條件：嚴(yan) 格控製電泳時間、電壓和緩衝(chong) 液pH，以確保結果的可重複性。
3、數據分析：使用標準化軟件分析彗星圖像，避免主觀誤差。
4、對照設置：設置陽性和陰性對照，確保實驗結果的可靠性。

彗星實驗，單細胞凝膠電泳實驗檢測服務 僅(jin) 供科研實驗用，不做其他用途！