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心鈉素(ANP)放免實驗代測
原理(Principles) 本藥盒采用競爭(zheng) 性放射免疫分析方法。125I-ANF 標記物和血樣品(或標準品)中的 ANF 與(yu) 抗體(ti) 競爭(zheng) 性結合,加入分離劑,使複合物部分與(yu) 遊離抗原部分分離,棄上清,測沉澱物 的放射性計數。放射強度與(yu) 抗原濃度成反比。
用途(Intended Use) 心鈉素是心房產(chan) 生和分泌的一種激素,具有很強的利鈉、利尿、舒張血管和降低血壓 的作用。本藥盒采用平衡法,免疫沉澱劑分離法,測定人血漿中 ANF 的含量,用於(yu) 人心血 管疾病的診斷及治療監測。
血漿及組織處理 1) 血漿樣品:采靜脈血 2 mL(空腹),置含有抗凝劑 30 μL 的試管中,立即混勻抗凝, 及時離心取出血漿,分裝–20℃保存備用。 2) 組織樣品:盡快取出動物髒器(心房、心室或其它組織)吸去血(或用生理鹽水洗 並吹幹),稱重,及時放入 5 至 10 倍組織體(ti) 積的冷 1N HAC,沸水浴中 10 分鍾,取出 上清液,分裝–20℃保存備用。測定時可根據組織中 ANF 含量作 1:10 – 1:1000 倍稀釋。
正常參考值(Normal Serum values) 各實驗室應根據本實驗室條件及接觸人群的不同,建立自己的正常值範圍。 下列數據僅(jin) 供參考:0.379 ± 0.0766 ng/mL
數據處理(Calculation) 取三級半對數坐標紙,以 B/B0(%)為(wei) 縱坐標,標準品濃度的對數為(wei) 橫坐標,繪製標準曲 線;樣品以 B/B0(%)從(cong) 標準曲線上查得相應的劑量,再乘以稀釋倍數,則為(wei) 血漿或組織中 ANF 實際含量。也可用 Logit-log 作圖或回歸計算。
標準曲線: B (cpm) NSB (cpm) B (cpm) NSB (cpm) B/B % 0 0 管 試劑 標準 試劑 - 樣品: B (cpm) NSB (cpm) B (cpm) NSB (cpm) B/B % 0 0 管 試劑 樣品 - 樣品
注意事項(Attention) 1) ANF 是極易失活的多肽,在體(ti) 液中的生理半衰期隻有 2.5 分鍾,所組成的藥盒也相應 “嬌氣"。標準品極易吸附管壁,加入溫育液,待溶解後上下輕輕翻動,然後置 4℃冰 箱 30 分鍾後,再混勻後立即分裝加蓋或塑料袋包裝後存放於(yu) –20℃,臨(lin) 用時取出。 2) 血漿或組織樣品一定要立即處理,及時分裝–20℃存放。溶血者不能使用,否則結果偏 高。 3) 標記物若要分批使用,溶解後分成幾份–20℃存放,用前取出,每份一次用完。 4) 加入分離劑後及時離心,暫不離心時可放 4℃(1 小時內(nei) 離心均可以),但不宜在室溫 放置。 5) 分析管離心後棄上清所用的吸頭要,否則可能汙染 ANF 分析管造成數據異常。
心鈉素(ANP)放免實驗代測