原位雜交實驗，原位雜交實驗代測

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原位雜交實驗，原位雜交實驗代測

原位雜交（in situ hybridization）將標記的核酸探針與(yu) 細胞或組織中的核酸進行雜交，稱為(wei) 原位雜交。用原位雜交技術，可在原位研究細胞合成某種多肽或蛋白質的基因表達。此方法有很高的敏感性和特異性，可進一步從(cong) 分子水平來探討細胞的功能表達及其調節機製。已成為(wei) 當今細胞生物學、分子生物學研究的重要手段。

原位雜交實驗步驟：前期胚胎的製備。

原位雜交*天進行重新水化和固定、預雜交、雜交。

原位雜交第二天進行 1 將探針回收，放於(yu) －20C保存（通常探針可重複使用十次左右）2加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升，60℃，放置30分鍾，重複一次。3置換2XSSCT1ml，60℃，放置15分鍾。4置換0.2XSSCT1ml，60℃，放置30分鍾，重複一次。5用MABT洗兩(liang) 次，每次五分鍾，放在搖床輕輕搖動。6室溫下加1ml 1：2：7溶液，時間為(wei) 一小時。  7  按1：3000的比例在1：2：7溶液中加入酶連地高辛抗體(ti) ，4C 冰箱過夜。

原位雜交第三天進行1） 用1ml含10%熱滅活血清的MABT溶液置換抗體(ti) 溶液，放置搖床上25分鍾，然後用1mlMABT置換，25分鍾，再用1mlMABT溶液置換，一小時以上，zui後用1mlMABT溶液置換，25分鍾。2） 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分鍾。3）將胚胎轉入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate（底物，用之前加5mM左旋米唑），十六孔板外麵包上錫箔紙以避光，避免搖動，室溫下顯色。4）每隔一小時觀察胚胎是否開始顯色5）將顯色*的胚胎中的底物吸出，用PBST洗兩(liang) 三次後加上4%多聚甲醛固定，拍照。6）4C冰箱保存。

原位雜交實驗，原位雜交實驗代測服務內(nei) 容：

• 細胞特異性mRNA轉錄的定位，可用於基因圖譜，基因表達和基因組進化的研究；

• 感染組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位，如EB病毒mRNA、人類乳頭狀瘤病毒和巨細胞病毒DNA的檢測；

③     癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉錄水平的表達及其變化的檢測；

④     基因在染色體(ti) 上的定位；

⑤     檢測染色體(ti) 的變化，如染色體(ti) 數量異常和染色體(ti) 易位等；

⑥     分裂間期細胞遺傳(chuan) 學的研究，如遺傳(chuan) 病的產(chan) 前診斷和某些遺傳(chuan) 病基因攜帶者的確定，某些腫瘤的診斷和生物學劑量測定等。

上海信帆生物代做原位雜交實驗，歡迎大家！