EdU染色

EdU染色

服務介紹：

EdU（5-Ethynyl-2’- deoxyuridine）是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶（T）滲入正在複製的DNA分子中，通過基於(yu) EdU與(yu) Apollo®熒光染料的特異性反應快速檢測細胞DNA複製活性，適用於(yu) 細胞增殖、細胞分化、生長與(yu) 發育、DNA修複、病毒複製、細胞標記示蹤等方麵。

實驗流程：

1 每孔加入100μL滲透劑(0.5% TritonX-100的PBS)脫色搖床孵育10分鍾；PBS清洗1次，5分鍾。

2每孔加入100 μL的EDU染色反應液（配置比例見下表），避光、室溫、脫色搖床孵育30分鍾後，棄染色反應液；

3染核：爬片置於(yu) PBS（PH7.4）中在脫色搖床上避光晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩幹後滴加dapi染液，或hochest染液室溫避光染核10min。

4封片：爬片用PBS（PH7.4）洗滌3次，每次5min。爬片稍甩幹後將有細胞的一麵朝下用抗熒光淬滅封片劑將玻片封固在載玻片上封片。

5 鏡檢拍照：切片於(yu) 尼康正置熒光顯微鏡下觀察並采集圖像。（紫外激發波長330-380nm，發射波長420nm；FITC綠光激發波長465-495nm，發射波長515-555 nm；555紅光激發波長550nm，發射波長590nm）

結果判讀：

DAPI染出來的細胞核在紫外的激發下為(wei) 藍色，陽性表達為(wei) 相應熒光素標記的紅光或者綠光

送樣運輸要求：

1.組織樣本放置於(yu) 20倍樣本體(ti) 積的固定液中固定24h以上，常溫運輸送樣。

2.石蠟切片常溫保存運輸

3.冰凍切片-20℃保存運輸

4.細胞爬片PFA固定15min後用無菌PBS洗滌後用無菌PBS浸泡，4℃冰袋保存運輸到實驗室。

注意事項：

1.檢測之前需動物活體(ti) 注射化學試劑EdU，細胞需用化學試劑EdU處理造模，否則無陽性。