免疫熒光單標雙色（芯片）

免疫熒光單標雙色（芯片）

服務介紹：

組織芯片免疫熒光染色,是將許多不同處理的組織以規則的微陣列方式排列於(yu) 同一載體(ti) 上，同時進行相同指標的免疫熒光檢測。

實驗流程：

1. 石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入環保型脫蠟液10min-環保型脫蠟液10min-環保型脫蠟液10min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-無水乙醇Ⅲ5min-蒸餾水洗。

2. 抗原修複：組織切片置於(yu) 盛滿EDTA抗原修複緩衝(chong) 液（PH8.0）的修複盒中於(yu) 微波爐內(nei) 進行抗原修複。中火8min停火8min轉中低火7min，此過程中應防止緩衝(chong) 液過度蒸發，切勿幹片。自然冷卻後將玻片置於(yu) PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。(修複液和修複條件根據組織來確定）

3. 畫圈：切片稍甩幹後用組化筆在組織周圍畫圈（防止抗體(ti) 流走）

4. 血清封閉:在圈內(nei) 滴加BSA孵育30min。（一抗若是山羊來源，則加驢血清）

5. 加第一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放於(yu) 濕盒內(nei) 4°C孵育過夜。（濕盒內(nei) 加少量水防止抗體(ti) 蒸發）

6. 加二抗：玻片置於(yu) PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩幹後在圈內(nei) 滴加與(yu) 一抗相應種屬標記的按一定比例配好的二抗覆蓋組織，室溫孵育50min。

7. DAPI複染細胞核：切片稍甩幹後在圈內(nei) 滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min。

8. 自發熒光淬滅：切片稍甩幹後，在圈內(nei) 加入自發熒光淬滅劑5min，流水衝(chong) 洗10min。

9. 封片：玻片置於(yu) PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩幹後用抗熒光淬滅封片劑封片。

10.鏡檢拍照：切片置於(yu) 掃描儀(yi) 下采集圖像或熒光顯微鏡下拍照。（DAPI紫外激發波長330-380nm，發射波長420nm，發藍光；FITC激發波長465-495nm，發射波長515-555 nm，發綠光；CY3激發波長510-560，發射波長590nm，發紅光. CY5激發波長 608-648nm, 發射波長672-712。 DAPI染出來的細胞核在紫外的激發下為(wei) 藍色，陽性表達為(wei) 相應熒光素標記的紅光，綠光 。

送樣運輸要求：

　　1.組織樣本放置於(yu) 20倍樣本體(ti) 積的固定液中固定24h以上，常溫運輸送樣。

　　2.石蠟切片常溫保存運輸。