原位雜交（FISH、FISH、IF三染）

原位雜交（FISH、FISH、IF三染）

服務介紹：

原位雜交與(yu) 免疫熒光原理：原位雜交是指將特定標記的已知序列核酸為(wei) 探針與(yu) 細胞或組織切片中核酸進行雜交，從(cong) 而對特定核酸順序進行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細胞標本或組織標本上進行。免疫熒光就是將不影響抗原抗體(ti) 活性的熒光色素標記在抗體(ti) 或抗原上，與(yu) 其相應的抗原或抗體(ti) 結合後，在熒光顯微鏡下呈現一種特異性熒光反應。

通過原位雜交雙探針及免疫熒光進行三標，可以在組織細胞中對核酸分子和蛋白指標同時進行共定位、以及定性分析，可以用來從(cong) 共定位角度提示核酸和蛋白存在相互作用。

實驗流程：

石蠟切片熒光探針原位雜交雙探針與(yu) 免疫熒光三染實驗步驟

1. 組織固定、脫水、切片、石蠟切片脫蠟至水;

2. 消化：切片於(yu) 修複液中煮沸10-15分鍾，滴加蛋白酶K消化;

3. 預雜交：滴加預雜交液，37°C孵育1h。

4. 雜交：傾(qing) 去預雜交液，滴加含探針probe1+probe2 雜交液, 濃度 ，恒溫箱 度雜交過夜。

5. 雜交後洗滌：SSC洗滌;

6. 孵育一抗、二抗：滴加一抗，4℃過夜，後PBS洗3×5min;滴加相應二抗，室溫孵育50min，PBS洗3×5min;

7. DAPI複染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min;

8. 鏡檢拍照;

送樣要求：

1、切片前處理要求：新鮮組織幹冰運輸後做冰凍切片；或取2mm左右厚度的新鮮組織，5min內(nei) 投入原位雜交固定液內(nei) 固定，4℃低溫保存運輸，切勿冷凍結冰，盡快包埋切片後進行原位雜交實驗，固定時間過長影響核酸檢出率；

2、冰凍切片：冰凍切片-20℃運輸；

3、石蠟切片：石蠟切片常溫運輸；

4、細胞爬片：細胞爬片加原位雜交固定液固定15min後，換無酶PBS，密封，4℃運輸。 

單據填寫(xie) ：

1、探針合成：需提供待測目的基因序列或基因登錄號、所需標記類型；

2、自帶探針需告知完整探針信息；

3、寫(xie) 明檢測要求。