原位雜交（FISH雙標）

服務介紹：

原位雜交原理：原位雜交是指將特定標記的已知序列核酸為(wei) 探針與(yu) 細胞或組織切片中核酸進行雜交，從(cong) 而對特定核酸順序進行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細胞標本或組織標本上進行。

原位雜交(FISH雙標)可以檢測兩(liang) 個(ge) 靶基因的共定位情況。

實驗流程：

細胞爬片熒光探針原位雜交雙標實驗步驟

1、細胞爬片固定：細胞爬片置於(yu) 4%多聚甲醛(DEPC)固定20min，於(yu) PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。

2、消化：基因筆畫圈，根據不同組織不同指標特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml)消化8min。純水衝(chong) 洗後PBS洗3次×5min。.

3、預雜交：滴加預雜交液37°恒溫箱1h。

4、雜交：傾(qing) 去預雜交液，滴加含探針1雜交液，37度雜交過夜。

5、雜交後洗滌：洗去雜交液，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC 37°洗10min。若非特異雜交體(ti) 較多，可以增加甲酰胺洗滌

6、雜交：傾(qing) 去預雜交液，滴加含探針2雜交液，37度雜交過夜。

7、DAPI複染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min，衝(chong) 洗後滴加抗熒光淬滅封片劑封片。

8、鏡檢拍照：切片於(yu) 尼康正置熒光顯微鏡下觀察並采集圖像。(紫外激發波長330-380nm，發射波長420nm,發藍光;FAM(488)綠光激發波長465-495nm，發射波長515-555 nm，發綠光;CY3紅光激發波長510-560，發射波長590nm，發紅光。)　　

送樣要求：

1、切片前處理要求：新鮮組織幹冰運輸後做冰凍切片；或取2mm左右厚度的新鮮組織，5min內(nei) 投入原位雜交固定液內(nei) 固定，4℃低溫保存運輸，切勿冷凍結冰，盡快包埋切片後進行原位雜交實驗，固定時間過長影響核酸檢出率；

2、冰凍切片：冰凍切片-20℃運輸；

3、石蠟切片：石蠟切片常溫運輸；

4、細胞爬片：細胞爬片加原位雜交固定液固定15min後，換無酶PBS，密封，4℃運輸。 

單據填寫(xie) ：

1、探針合成：需提供待測目的基因序列或基因登錄號、所需標記類型；

2、自帶探針需告知完整探針信息；

3、寫(xie) 明檢測要求。