RNA提取逆轉錄

RNA提取逆轉錄

服務介紹：

細胞中的RNA可分為(wei) 信使RNA、轉運RNA和核糖體(ti) RNA三大類，不同組織總RNA提取實質就是將細胞裂解，釋放出RNA，並通過不同方式去除蛋白、DNA等雜質，最終獲得高純RNA產(chan) 物的過程。再在逆轉錄酶的催化下，隨機引物、oligo(dT)或基因特異性引物的引導下合成互補的DNA (complementary DNA，cDNA)。 

實驗流程：

取材-RNA提取-測濃度-逆轉錄成cDNA 

其中mRNA、lncRNA、circRNA為(wei) 普通逆轉錄；

miRNA采取特異性逆轉錄(需提供基因名稱和種屬，方便設計引物用於(yu) 特異性逆轉錄 )，默認做莖環法的逆轉錄，如需做加尾法逆轉錄請特別備注說明。

送樣運輸要求：

1. 樣品處理

a) 動物組織：常規組織100mg，脂肪組織，結締組織，纖維化組織適當增加。將組-織剪切成合適大小後（建議組織塊長寬高均不大於(yu) 0.5 cm），然後迅速完-全浸泡於(yu) 5～10倍體(ti) 積的RNAsolid™試劑中。（注意：已浸入RNAsolid™試劑中的組織經平衡一段時間後，可從(cong) 溶液中取出，切成更小的組織塊，再重新放回RNAsolid™試劑中；有些比較弱的液體(ti) 滲透性組織如骨頭等，不適合用RNAsolid™試劑進行RNA保護。）

b) 植物組織：新鮮的葉、果肉、種子最少100 mg。將嫩葉，嫩莖組織切成合適的大小（建議長寬高均不大於(yu) 0.5 cm）後，然後迅速完-全浸泡於(yu) 5～10倍體(ti) 積的RNAsolid™試劑中。（注意：某些植物組織天生具有的屏障，如葉子表麵的蠟層可阻礙RNAsolid™試劑的滲透，對於(yu) 此類組織，通常需破壞這些屏障層以允許溶液的浸透。）

c) 細胞等樣本：收集不少於(yu) 10^6個(ge) 細胞沉澱（用PBS清洗1-2次），幹冰運輸。

d) 酵母、細菌等樣本：離心棄上清，收集一定量的菌體(ti) 沉澱，幹冰運輸。

e)全血：最少1 mL新鮮血液EDTA抗凝管，幹冰運輸。

f)血清或血漿：最少1 mL，幹冰運輸。

g)RNA樣品： OD260/280為(wei) 1.8-2.0，濃度≥100 ng/μL，體(ti) 積≥20μL，幹冰運輸。 

2. 樣品保存及運輸

加入有RNAsolid™試劑的樣本可在37℃保存1～2天，2天以後部分組織中的RNA會(hui) 開始降解。室溫（25℃）穩定保存1周，不會(hui) 有明顯的RNA降解發生。大部分樣品置於(yu) RNAsolid™試劑中，4℃條件下可穩定保存1個(ge) 月，不會(hui) 有明顯的RNA降解發生。長期存放可先將保存在RNAsolid™試劑中的樣本4℃浸透過夜，然後將RNAsolid™試劑吸出棄去，再將樣本放入-20℃或-80℃長期穩定保存3～5年。