甲基化檢測BSP

甲基化檢測BSP

服務介紹：

亞(ya) 硫酸氫鹽處理後測序(bisulfite sequencing PCR,BSP)法是檢測基因甲基化的經典方法，其原理為(wei) ：用亞(ya) 硫酸氫鹽處理基因組DNA，所有未發生甲基化的胞嘧啶(C)被轉化為(wei) 尿-嘧啶(U)，而甲基化的胞嘧啶則不變。隨後設計BSP引物進行PCR，在擴增過程中尿-嘧啶全部轉化為(wei) 胸腺嘧啶。最後，將PCR產(chan) 物克隆至載體(ti) 後進行測序，測序結果與(yu) 未經處理的序列比較，分析CpG位點是否發生甲基化，這種方法稱為(wei) BSP-克隆測序法。此方法精確度高，能明確目的片段中每一個(ge) CpG位點的甲基化狀態。一般選取10個(ge) 克隆子的測序結果進行數據分析。

　　實驗流程：

取材-提取基因組DNA-亞(ya) 硫酸氫鹽處理-純化DNA-BSP引物合成-PCR擴增-TA克隆-測序-發報告

送樣運輸要求：

動物組織：新鮮的組織量100 mg(黃豆大小)，最少50 mg（綠豆大小），脂肪組織、結締組織、纖維化組織適當增加。幹冰運輸。

植物組織：新鮮的葉、果肉、種子等最少需100 mg。幹冰運輸。

細胞：1×10^6個(ge) 細胞，收集細胞沉澱，幹冰運輸。

全血：最少1 mL新鮮血液EDTA抗凝管，-20度運輸。

DNA：體(ti) 積≥50 uL，濃度≥ 50 ng/uL，幹冰運輸。

注：植物樣本的甲基化實驗需要客戶提供具體(ti) 的啟動子序列信息。