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木聚糖酶(檢測服務)
服務介紹:
木聚糖酶能將木聚糖降解成還原性寡糖和單糖,在沸水浴條件下可以與(yu) 3,5-二硝基水楊酸(DNS)試劑發生顯色反應。反應液顏色的深度與(yu) 酶解產(chan) 生的還原糖量成正比,而還原糖的生成量又與(yu) 反應液中木聚糖酶的活力成正比。因此,通過測定反應液顏色的強度,可以計算反應液中木聚糖酶的活力。
背景介紹:
木聚糖酶(Xylanase)又稱戊聚糖酶,是指能專(zhuan) 一降解木聚糖為(wei) 低聚木糖和木糖的水解酶。它是一組複雜的複合酶係,主要包括β-1,4-木聚糖酶和β-木糖苷酶等。木聚糖酶的活性來源於(yu) 經選擇的木黴菌等微生物,經過基因工程的轉化、發酵、提取而得。
木聚糖酶在自然界分布廣泛,可從(cong) 動物、植物和微生物中獲得。微生物來源的木聚糖酶普遍存在於(yu) 自然界中,且種類繁多,應用領域廣泛。目前研究和應用得最多的是細菌和真菌來源的木聚糖酶,其中細菌可以產(chan) 生堿性和酸性木聚糖酶。
應用:
1、改善消化係統功能:木聚糖酶可以分解食物中的木聚糖,使食物更容易被人體(ti) 消化和吸收,還可以促進腸道蠕動,有助於(yu) 改善便秘、消化不良等症狀。
2、促進營養(yang) 物質的吸收:木聚糖酶可以分解食物中的蛋白質、脂肪等營養(yang) 物質,使其更容易被人體(ti) 吸收利用,有助於(yu) 增強體(ti) 質,提高免疫力。
3、工業(ye) 應用:木聚糖酶在釀造、飼料工業(ye) 中也有廣泛應用。它可以分解釀造或飼料工業(ye) 中的原料細胞壁以及β-葡聚糖,降低釀造中物料的粘度,促進有效物質的釋放,以及降低飼料用糧中的非澱粉多糖,促進營養(yang) 物質的吸收利用。
操作步驟(僅(jin) 供參考):
1、準備樣品:
①固體(ti) 樣品稱取試樣兩(liang) 份,精確至0.001 g。 加入4ml Assay buffer,充分溶解,並定容至10 ml,在4 °C條件下避光保存1~2h。1000g離心3~5min,取上清液,再用Assay buffer做適當稀釋、定容(稀釋後的酶液中木聚糖酶活力最好能控製在0.04~0.10U/ml之間)。
②液體(ti) 樣品可以直接用Assay buffer稀釋、定容(稀釋後的酶液中木聚糖酶活力最好能控製在 0.04~0.10 U/ml之間)
2、配製木聚糖溶液:準確稱取0.15g 木聚糖,使充分溶解於(yu) 8ml去離子和5ml NH水溶液(3×)中,通過pH計測定,用YS溶液調節pH至5.5~5.6,補水至15ml
2、配製NH水溶液(1×):取1份NH水溶液(3×)和2份去離子水混合即成。
3、標準曲線繪製:取8支離心管按下表設置,準確吸取木糖標準(10mg/ml)與(yu) Assay buffer,即得不同濃度的木糖梯度標準。
加入物(ml) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
木糖標準(10mg/ml) | 0.01 | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.05 | 0.06 | 0.07 |
Assay buffer | 0.99 | 0.98 | 0.97 | 0.96 | 0.95 | 0.94 | 0.93 |
木糖標準(mg/ml) | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0.5 | 0.6 | 0.7 |
取1支離心管,加入0.08mlAssay buffer和0.1mlDNS試劑,混勻,沸水浴加熱5min,自來水冷卻至室溫,加NH水溶液(1×)0.32ml,即為(wei) 空白管。另取7支離心管,加入0.04ml 37℃預熱的Assay buffer、0.04ml木糖梯度標準和0.1mlDNS試劑,混勻,沸水浴加熱5min,自來水冷卻至室溫,加NH水溶液(1×)0.32ml,即為(wei) 標準管。以空白管調零,酶標儀(yi) 測定540nm處各管的吸光度。
測定樣品
①取適量的木聚糖溶液和酶提取液置於(yu) 不同的離心管中,37°C 平衡 20 min;木聚糖溶液使用之前應充分搖勻。
②取2支離心管按下表設置依次加入相應試劑:
加入物(ml) | 對照管 | 測定管 |
酶提取液 | 0.04 | 0.04 |
Assay buffer | 0.04 | - |
木聚糖溶液 | - | 0.04 |
37℃水浴30min | ||
DNS試劑 | 0.1 | 0.1 |
立即搖勻,放入沸水浴中顯色5min, 立即取出,流水冷卻至室溫,加 NH水溶液(1×)0.32ml |
以空白管調零,酶標儀(yi) 測定540nm處對照管和測定管的吸光度(分別記為(wei) A1、A0)。
實驗結果:
全自動生化儀(yi) 檢測後導出結果,結果由EXCEL形式發送。
送樣須知:
1.南京和上海地區的客戶可提供上門取樣服務,提前一天聯係
2.外地客戶可郵寄樣本,樣本運輸應符合一般的生物學要求,密封加冰袋或者幹冰運輸
3.若細胞、血清、組織樣本具有潛在的傳(chuan) 染性或致病性,請務必提前告知
4.測試結束提供實驗報告後,樣本可以保留1個(ge) 月,若需保留樣本或者回收樣本請提前告知。
備注:本公司對客戶的項目的專(zhuan) 有技術和資料(包括實驗方案,測試結果,樣本等)負有絕對保密的責任。
僅(jin) 供科研實驗用,不做其他用途!
木聚糖酶(檢測服務)