硫酸葡聚糖-瓊脂糖

硫酸葡聚糖-瓊脂糖

1 、產(chan) 品介紹

NuPerley DexS-HbP和NuPerley  DexS-VirS是將硫酸葡聚糖（Dextran Sulfate）鍵合在新一代高剛性瓊脂糖微球NuPerley 上形成的一種親(qin) 和層析分離介質。硫酸葡聚糖又稱右旋糖酐硫酸酯，是天然多糖右旋糖酐的合成衍生物，具有與(yu) 肝素類似的的生物活性，是一種非動物源的仿肝素配基，填料產(chan) 品被稱為(wei) 仿肝素親(qin) 和填料。

NuPerley DexS-HbP的含硫量相對低（40~80μmol/mL），可用於(yu) 蛋白的親(qin) 和分離、純化，例如血漿蛋白。同時，硫酸酯是一種優(you) 良的耐鹽型陽離子交換配基，NuPerley DexS-HbP也可作為(wei) 陽離子交換填料，對溶菌-酶的結合量大於(yu) 60mg/mL，且在50~150mM NaCl鹽濃度下仍結合良好。

NuPerley DexS-VirS的含硫量相對高（70~130 μmol/mL），主要用於(yu) 用於(yu) 病毒和病毒樣顆粒（VLP）的捕獲與(yu) 純化。

2 、產(chan) 品特點與(yu) 技術指標 

注：a90%體(ti) 積以上的微球在此粒徑範圍；b 10 cm 柱高下的最大測試流速。

3 、使用方法參考

3.1  色譜柱裝填

以下闡述與(yu) 層析係統連接時，填料的色譜柱裝填方法。

（1）所有需要用到的材料的溫度要與(yu) 色譜操作的溫度一樣，液體(ti) 最好做脫氣處理。裝柱液一般為(wei) 純水，也可含10~100 mM NaCl。

（2）填料用量計算：通過沉降定量填料體(ti) 積，需要的沉降填料體(ti) 積=柱體(ti) 積×壓縮比（也稱壓縮因子）。沉降體(ti) 積是指填料在20%乙醇保存液中自然沉降完-全讀取的穩定 體(ti) 積。NuPerley DexS-HbP和NuPerleyDexS-VirS 的壓縮比為(wei) ~1.10。為(wei) 使達到裝柱比，可通過柱頭下壓的方法，也可以通過高流速壓柱。

（3）填料清洗：將填料懸液充分搖勻後量取相應體(ti) 積，抽濾除去液體(ti) ，並用約3倍填料體(ti) 積的純化水洗滌，重複3次，以除去保存液。

（4）裝柱填料懸液準備：將填料轉移到適當的容器中，加入適量的裝柱液，製成50~75 v%的裝柱填料懸液，使用前攪勻。

（5）裝填前準備：在清洗幹淨的層析柱下端加入裝柱液，以除去下墊片及層析柱下端的空氣，在柱內(nei) 保留少量的純水，擰緊下堵頭，調整柱子使其垂直於(yu) 地麵。

（6）裝填：將攪勻後的填料懸液一次性緩慢倒入層析柱內(nei) （必要時使用裝柱器），為(wei) 避免引入氣泡，應使之沿層析柱內(nei) 壁自然流下。將所有填料加入後，用裝柱液將裝柱器加滿，擰緊裝柱器上蓋，將柱子與(yu) 層析係統連接。

（7）壓柱：使柱內(nei) 填料自然沉降（或50~150 cm/h 的低流速下沉降），待填料沉降完-全後（填料與(yu) 液體(ti) 的界麵清晰），去除裝柱器，裝上上柱頭，並將柱頭下降至界麵處；通過高流速（推薦流速見下表，注意柱壓不超過0.3MPa），繼續壓柱至界麵清晰穩定，標記界麵穩定時的柱高。停泵，打開柱頭上的閥門/堵頭，關(guan) 閉柱底的閥門/堵頭，下壓柱頭至標記位置下方與(yu) 壓縮比對應的位置，旋緊柱頭，裝柱完成。裝柱完成後，需用高流速平衡柱內(nei) 的填料。

3.2  柱效測定和評價(jia)

完成裝柱後、使用前可通過柱效測定和評價(jia) 可以確認層析柱裝填質量。柱效通常用理論塔板高度（HETP）和非對稱因子（As）來評價(jia) 。

3.3 平衡與(yu) 上樣（Equilibration & Loading）

在上樣前，可用初始緩衝(chong) 液A 在操作流速下平衡層析柱，觀察檢測器的變化，直到電導、pH  等參數不變。根據應用不同，本產(chan) 品的緩衝(chong) 液體(ti) 係可為(wei) 磷酸鹽、檸檬酸鹽和Tris-HCl 等，pH 為(wei) 4~9 居多，例如10 mM PB + 150 mM NaCl ，pH7.5。

樣品通常溶於(yu) 上述緩衝(chong) 液A，或者將樣品溶液進行換液處理，置換成緩衝(chong) 液A 體(ti) 係。上樣量可按“mg 目標蛋白/mL  填料"來設定，通常為(wei) DBC10% 的50~80%，例如NuPerley DexS-HbP 產(chan) 品對溶菌-酶的DBC10%為(wei) ~10 mg/mL，純化 BSA 時的上樣量可為(wei) 5~10 mg/mL。除了DBC10%，也可以測試上樣流穿液中的目標蛋白確定上樣量。

3.4  洗脫（Elution）

洗脫過程則可以進一步提高緩衝(chong) 液A 中的鹽濃度，添加0.5~2 M 的NaCl 可將目的 蛋白有效洗脫。在前期工藝篩選時建議用線性梯度洗脫以確定合適的洗脫濃度，在工藝優(you) 化和確定時建議用階躍梯度洗脫，以節省洗脫液體(ti) 積和提高效率。

3.5  再生（Regeneration）和在位清洗（CIP）

通常上述的再生過程可將填料徹-底清洗。若發生柱壓升高，或為(wei) 了避免交叉汙染，可采用以下溶劑進行再生與(yu) 在位清洗：1~2 mol/L NaCl，0.5 mol/L NaOH、70%乙醇或 30%  異丙醇等。在位清洗可有效去除介質上的雜質，反向效果更佳。清洗後需用3~5 柱體(ti) 積的純水除去上述溶劑。

3.6  填料保存

填料的初始保存液為(wei)  20%乙醇，使用過後可繼續用相同的保存液，也可在20%乙醇的基礎上添加0.1~1 M NaCl。保存溫度在2~8 ℃為(wei) 宜，不可凍存。