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人一氧化碳血紅蛋白(HbCO)檢測試劑盒

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人一氧化碳血紅蛋白(HbCO)檢測試劑盒實驗中的洗滌 

洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應步驟,但卻也決定著實驗的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達到分離遊離的和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質,以及在反應過程中非特異性地吸附於固相載體的幹擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的,而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的幹擾物質洗滌下來。可以說在ELISA操作中,洗滌是zui主要的關鍵技術,應引起操作者的高度重視,操作者應嚴格按要求洗滌,不得馬虎。洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動洗滌儀外,人一氧化碳血紅蛋白(HbCO)檢測試劑盒工操作有浸泡式和流水衝洗式兩種,過程如下:
(1)浸泡式 a.吸幹或甩幹孔內反應液;b.用洗滌液過洗一遍將洗滌液注滿板孔後,即甩去c.浸泡,即將洗滌液注滿板孔,放置1-2分鍾,間歇搖動,浸泡時間不可隨意縮短;d.吸幹孔內液體。吸幹應*,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體後在清潔毛巾或吸水紙上拍幹;e.重複操作cd,洗滌3-4或按說明規定。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數或延長浸泡時間。微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩衝液。聚苯乙烯載體與蛋白質的結合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團,也含親水基團,其疏水基團與蛋白質的疏水基團借疏水鍵結合,從而削弱蛋白質與固相載體的結合,並借助於親水基團和水分子的結合作用,使蛋白質回複到水溶液狀態,從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,其濃度可在0.05%-0.2%之間,高於0.2%時,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度。
(2)流水衝洗式 流水衝洗法zui初用於小珠載體的洗滌,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時附接一特殊裝置,使小珠在流水衝擊下不斷地滾動淋洗,持續衝洗2分鍾後,吸幹液體,再用蒸餾水浸泡2分鍾,吸幹即可。浸泡式猶如盆浴,流水衝洗式則好比淋浴,其洗滌效果更為*,且也簡便、快速。已有實驗表明,流水衝洗式同樣也適用於微量滴定板的洗滌。洗滌時設法加大水流量或加大水壓,讓水流衝擊板孔表麵,洗滌效果更佳。 

 

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