嘔吐毒素（vomitoxin）ELISA Kit

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嘔吐毒素（vomitoxin）ELISA Kit 實驗中的顯色和比色 
（1） 顯色 
顯色是ELISA中的zui後一步溫育反應，此時酶催化無色的底物生成有色的產(chan) 物。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內(nei) ，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當提高溫度有助於(yu) 加速顯色進行。在定量測定中，加入底物後的反應溫度和時間應按規定力求準確。定性測定的顯色可在室溫進行，時間一般不需要嚴(yan) 格控製，有時可根據陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當縮短或延長反應時間，及時判斷。
OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應20-30分鍾後即不再加深，再延長反應時間，可使本底值增高。OPD底物液受光照會(hui) 自行變色，顯色反應應避光進行，顯色反應結束時加入終止液終止反應。OPD產(chan) 物用硫酸終止後，顯色由橙黃色轉向棕黃色。 TMB受光照的影響不大，可在室溫中置於(yu) 操作台上，邊反應觀察結果。但為(wei) 保證實驗結果的穩定性，宜在規定的適當時間閱讀結果。TMB經HRP作用後，約40分鍾顯色達，隨即逐漸減弱，至2小時後即可*消退至無色。TMB的終止液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉（SDS）等酶抑製劑均可使反應終止。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間（12-24小時）不褪，是目視判斷的良好終止劑。此外，各類酸性終止液則會(hui) 使藍色轉變成黃色，此時可用特定的波長（450nm）測讀吸光值。
嘔吐毒素（vomitoxin）ELISA Kit（2） 比色 
比色前應先用潔淨的吸水紙拭幹板底附著的液體(ti) ，然後將板正確放入酶標比色儀(yi) 的比色架中。以軟板為(wei) 載體(ti) 的試驗，需先將板置於(yu) 標準96孔的座架中，才可進行比色。在加底物液顯色前，先將軟板邊緣剪淨，這樣，此板就可*平妥坐入座架中。比色時應先以蒸餾水校零點，測讀底物孔（未經任何反應僅(jin) 加底物液的孔）和空白孔（以生理鹽水或稀釋液代替標本作全過程的孔），以記錄本次試驗的試劑狀況。其後可用空白孔以蒸餾水校零點，以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度，然後進行計算。比色結果的表達以往通用光密度（oplical density，OD），現按規定用吸光度（absorbence，A），兩(liang) 者含義(yi) 相同。通常的表示方法是，將吸收波長寫(xie) 於(yu) A字母的右下角，如OPD的吸收波長為(wei) 492nm，表示方法為(wei) "A492nm"或"OD492nm"。
3） 酶標比色儀(yi)  
酶標比色儀(yi) 簡稱酶標儀(yi) ，通常指於(yu) 測讀ELISA結果吸光度的光度計。針對固相載體(ti) 形式的不同，各有特製的適用於(yu) 板、珠和小試管的設計。許多試劑公司配套供應酶標儀(yi) 。酶標儀(yi) 的主要性能指標有：測讀速度、讀數的準確性、重複性、精確度和可測範圍、線性等等。優(you) 良的酶標儀(yi) 的讀數一般可精確到0.001，準確性為(wei) ±1%，重複性達0.5%。舉(ju) 例說，若某孔測得的A值為(wei) 1.083，則該孔相對於(yu) 空氣的真實A值應為(wei) 1.083±0.01（1.073~1.093），重複測定數次，其A值均應1.083±0.05（1.078~1.088）在之間。酶標儀(yi) 的可測範圍視各酶標儀(yi) 的性能而不同。普通的酶標儀(yi) 在0.000~2.000，新型號的酶標儀(yi) 上限拓寬達2.900，甚至更高。超出可測上限的A值常以"*"或"over"或其它符號表示。應注意可測範圍與(yu) 線性範圍的不同，線性範圍常小於(yu) 可測範圍，比如某一酶標儀(yi) 的可測範圍為(wei) 0.000~2.900，而其線性範圍僅(jin) 0.000~2.000，這在定量ELISA中製作標準曲線時應予注意。 酶標儀(yi) 不應安置在陽光或強光照射下，操作時室溫宜在15~30℃，使用前先預熱儀(yi) 器15-30分鍾，測讀結果更穩定。測讀A值時，要選用產(chan) 物的敏感吸收峰，如OPD用492nm波長。有的酶標儀(yi) 可用雙波長式測讀，即每孔先後測讀兩(liang) 次，*次在zui適波長（W1），第二次在不敏感波長（W2），兩(liang) 次測定間不移動ELISA板的位置。例如OPD用492nm為(wei) W1，630nm為(wei) W2，zui終測得的A值為(wei) 兩(liang) 者之差（W1-W2）。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光幹擾。各種酶標儀(yi) 性能有所不同，使用中應詳細新聞記者說明書(shu) 。

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