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鹿血清澱粉樣蛋白A(SAA)ky体育在线登陆實驗中的洗滌
洗滌在ELISA過程中雖不是一個(ge) 反應步驟,但卻也決(jue) 定著實驗的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達到分離遊離的和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與(yu) 固相抗原或抗體(ti) 結合的物質,以及在反應過程中非特異性地吸附於(yu) 固相載體(ti) 的幹擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的,而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的幹擾物質洗滌下來。可以說在ELISA操作中,洗滌是zui主要的關(guan) 鍵技術,應引起操作者的高度重視,操作者應嚴(yan) 格按要求洗滌,不得馬虎。洗滌的方式除某些ELISA儀(yi) 器配有特殊的自動洗滌儀(yi) 外,
鹿血清澱粉樣蛋白A(SAA)ky体育在线登陆手工操作有浸泡式和流水衝(chong) 洗式兩(liang) 種,過程如下:
(1)浸泡式 a.吸幹或甩幹孔內(nei) 反應液;b.用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔後,即甩去);c.浸泡,即將洗滌液注滿板孔,放置1-2分鍾,間歇搖動,浸泡時間不可隨意縮短;d.吸幹孔內(nei) 液體(ti) 。吸幹應*,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體(ti) 後在清潔毛巾或吸水紙上拍幹;e.重複操作c和d,洗滌3-4次(或按說明規定)。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數或延長浸泡時間。微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為(wei) 含非離子型洗滌劑的中性緩衝(chong) 液。聚苯乙烯載體(ti) 與(yu) 蛋白質的結合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團,也含親(qin) 水基團,其疏水基團與(yu) 蛋白質的疏水基團借疏水鍵結合,從(cong) 而削弱蛋白質與(yu) 固相載體(ti) 的結合,並借助於(yu) 親(qin) 水基團和水分子的結合作用,使蛋白質回複到水溶液狀態,從(cong) 而脫離固相載體(ti) 。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,其濃度可在0.05%-0.2%之間,高於(yu) 0.2%時,可使包被在固相上的抗原或抗體(ti) 解吸附而減低試驗的靈敏度。
(2)流水衝(chong) 洗式 流水衝(chong) 洗法zui初用於(yu) 小珠載體(ti) 的洗滌,洗滌液僅(jin) 為(wei) 蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時附接一特殊裝置,使小珠在流水衝(chong) 擊下不斷地滾動淋洗,持續衝(chong) 洗2分鍾後,吸幹液體(ti) ,再用蒸餾水浸泡2分鍾,吸幹即可。浸泡式猶如盆浴,流水衝(chong) 洗式則好比淋浴,其洗滌效果更為(wei) *,且也簡便、快速。已有實驗表明,流水衝(chong) 洗式同樣也適用於(yu) 微量滴定板的洗滌。洗滌時設法加大水流量或加大水壓,讓水流衝(chong) 擊板孔表麵,洗滌效果更佳。
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