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黃曲黴毒素(AFT) ky体育在线登陆結果判定
定性測定
定性測定的結果判斷是對受檢標本中是否含有待測抗原或抗體(ti) 作出"有"或"無"的簡單回答,分別用"陽性"、"陰性"表示。"陽性"表示該標本在該測定係統中有反應。"陰性"則為(wei) 無反應。用定性判斷法也可得到半定量結果,即用滴度來表示反應的強度,其實質仍是一個(ge) 定性試驗。在這種半定量測定中,將標本作一係列稀釋後進行試驗,呈陽性反應的zui高稀釋度即為(wei) 滴度。根據滴度的高低,可以判斷標本反應性的強弱,這比觀察不稀釋標本呈色的深淺判斷為(wei) 強陽性、弱陽性更具定量意義(yi) 。 在間接法和夾心法ELSIA中,陽性孔呈色深於(yu) 陰性孔。在競爭(zheng) 法ELISA中則相反,陰性孔呈色深於(yu) 陽性孔。兩(liang) 類反應的結果判斷方法不同,分述於(yu) 下。
(1) 間接法和夾心法
這類反應的定性結果可以用肉眼判斷。目視標本也無色或近於(yu) 無色者判為(wei) 陰性,顯色清晰者為(wei) 陽性。但在ELSIA中,正常科研血清反應後常可出現呈色的本底,此本底的深淺因試劑的組成和實驗的條件不同而異,因此實驗中必須加測陰性對照。陰性對照的組成應為(wei) 不含受檢物的正常血清或類似物(見3.6)。在用肉眼判斷結果時,更宜用顯色深於(yu) 陰性對照作為(wei) 標本陽性的指標。目視法簡捷明了,但頗具主觀性。在條件許可下,應該用比色計測定吸光值,這樣可以得到客觀的數據。先讀出標本(sample,S)、陽性對照(P)、和陰性對照(N)的吸光值,然後進行計算。計算方法有多種,大致可分為(wei) 陽性判定值法和標本與(yu) 陰性對照比值法兩(liang) 類。
a.黃曲黴毒素(AFT)ky体育在线登陆陽性判定值
陽性判定值(cut-off value)一般為(wei) 陰性對照A值加上一個(ge) 特定的常數,以此作為(wei) 判斷結果陽性或陰性的標準。用此法判斷結果要求實驗條件十分恒定,試劑的製備必須標準化,陽性和陰性的對照品應符合一定的規格,須配用精密的儀(yi) 器,並嚴(yan) 格按規定操作。陽性判定值公式中的常數是在這特定的係統中通過對大量標本的實驗檢測而得到的。現舉(ju) 某種檢測HBsAg的試劑盒為(wei) 例。試劑盒中的陰性對照品為(wei) 不含HBsAg的複鈣人血漿,陽性對照品HBsAg的含量標明為(wei) P=9±2ng/ml。每次試驗設2個(ge) 陽性對照和3個(ge) 陰性對照。測得A值後,先計算陰性對照A值的平均數(NCX)和陽性對照A值的平均數(PCX),兩(liang) 個(ge) 平均數的差(P-N)必須大於(yu) 一個(ge) 特定的數值(例0.400),試驗才有效。3個(ge) 陰性對照A值均應≥0.5×NCX,並≤1.5×NCX,如其中之一超出此範圍,則棄去,而已另兩(liang) 個(ge) 陰性對照重新計算NCX;如有兩(liang) 個(ge) 陰性對照A值超出以上範圍,則該次實驗無效。陽性判定值按下式計算:
陽性判定值=NCX+0.05 標本A值>陽性判定值的為(wei) 陽性,小於(yu) 陽性判定值的為(wei) 陰性。應注意的是,式中0.05為(wei) 該試劑盒的常數,隻適合於(yu) 該特定條件下,而不是對各種試劑均可通用。
根據以上敘述可以看出,在這種方法中陰性對照和陽性對照也起到試驗的質控作用,試劑變質和操作不當均會(hui) 產(chan) 生"試驗無效"的後果。
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