大鼠N端前腦鈉素ELISA檢測試劑盒

產(chan) 品名稱：大鼠N端前腦鈉素ELISA檢測試劑盒

英文名稱：Rat NT-proBNP ELISA KIT

貨號：XFR30129

規格：48T/96T

有效期：6個(ge) 月

保存條件：2-8℃

用途：本試劑盒用於(yu) 體(ti) 外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關(guan) 液體(ti) 樣本中大鼠N端前腦鈉素（NT-proBNP）的含量。

檢測原理

試劑盒采用雙抗體(ti) 一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被大鼠N端前腦鈉素（NT-proBNP）捕獲抗體(ti) 的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體(ti) ，經過溫育並徹-底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠N端前腦鈉素（NT-proBNP）呈正相關(guan) 。用酶標儀(yi) 在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

以下隻是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中，不得使用疊氮鈉做為(wei) 防腐劑。

1.  血清：使用不含熱原和內(nei) 毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，將收集於(yu) 血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然後1000×g離心20 分鍾，取上清即可，或將上清置於(yu) -20℃或-80℃保存，但應避免反複凍融。

2.  血漿：用EDTA或肝素作為(wei) 抗凝劑采集標本，並將標本在采集後的30分鍾內(nei) 於(yu) 2-8℃ 1000×g離心15分鍾，取上清即可檢測，或將上清置於(yu) -20℃或-80℃保存，但應避免反複凍融。

3.  細胞培養(yang) 物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鍾，取上清即可檢測，或將上清置於(yu) -20℃或-80℃保存，但應避免反複凍融。

4.  組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)衝(chong) 洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會(hui) 影響測量結果），稱重後將組織-剪碎。將剪碎的組織與(yu) 對應體(ti) 積的PBS（一般按1:9的重量體(ti) 積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體(ti) 體(ti) 積可根據實驗需要適當調整，並做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑製劑）加入玻璃勻漿器中，於(yu) 冰上充分研磨。為(wei) 了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反複凍融。最後將勻漿液於(yu) 5000×g離心5~10分鍾，取上清檢測。

注：標本溶血會(hui) 影響最後檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

5.  保存：如果樣本收集後不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存於(yu) -20℃，避免反複凍融，在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標儀(yi) （450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

試劑盒組成

注：

1.  標準品濃度依次為(wei) ：1200、600、300、150、75、0 pg/mL

2.  經過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測範圍內(nei) ，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時，可用樣本-稀釋液將標本進行適當稀釋後再進行實驗。

操作注意:

1. 嚴(yan) 格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用後立即冷藏保存試劑。所有液體(ti) 組分使用前充分搖勻。

2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸幹孔內(nei) 液體(ti) 。溫育過程中不要讓微孔幹燥掉。

3. 消除板底殘留的液體(ti) 和手指印，否則影響OD值。

4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標本的交叉汙染以免造成錯誤結果。

6. 在儲(chu) 存和溫育時避免強光直接照射。

7. 平衡至室溫後再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體(ti) 。任何漂白成分都會(hui) 破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

9. 不能使用過期產(chan) 品。

10. 如果樣本可能傳(chuan) 播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。

試劑的準備

1.試劑盒從(cong) 冷藏環境中取出應在室溫平衡後方可使用。

2. 20×洗滌緩衝(chong) 液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩衝(chong) 液加19份的蒸餾水。 

洗板方法

1.  手工洗板：甩盡孔內(nei) 液體(ti) ，每孔加滿洗滌液，靜置1min後甩盡孔內(nei) 液體(ti) ，在吸水紙上拍幹，如此洗板5次。

2.  自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟

1.  從(cong) 室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條，剩餘(yu) 板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.  待測樣本孔先加待測樣本50μL，空白孔不加。樣本不足的情況下，上樣量最少10μL。操作方法：待測樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本-稀釋液40μL。

4.  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體(ti) 100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體(ti) ，吸水紙上拍幹，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍幹，如此重複洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nei) ，在450nm波長處測定各孔的OD值。 

實驗結果計算:

以所測標準品的OD值為(wei) 橫坐標，標準品的濃度值為(wei) 縱坐標，在坐標紙上或用相關(guan) 軟件繪製標準曲線，並得到回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。

試劑盒性能

1.  檢測範圍：37.5 pg/mL - 1200 pg/mL。

2.  靈敏度：最-低檢測濃度小於(yu) 0.1 ng/mL。

3.  特異性：不與(yu) 其它可溶性結構類似物交叉反應。

4.  重複性：板內(nei) 變異係數小於(yu) 10% ，板間變異係數小於(yu) 15%

其他注意事項:

1. 最終的實驗結果與(yu) 試劑的有效性、實驗者的相關(guan) 操作以及當時的實驗環境密切相關(guan) ，請務必準備充足的標本備份。

2. 隻有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能混用其他製造商或者不同批次的產(chan) 品。嚴(yan) 格遵守試劑盒的實驗說明才會(hui) 得到最佳的檢測結果。

3. 本公司隻對試劑盒本身負責，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預留充足的樣本。

4. 使用化學裂解液製備的組織勻漿或細胞提取液可能會(hui) 由於(yu) 某些化學物質的引入導致ELISA實驗結果偏差。

5. 若樣本為(wei) 細胞培養(yang) 上清，因該類樣本幹擾因素較多，如：細胞狀態、細胞數量、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況。

6. 某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為(wei) 與(yu) 本產(chan) 品所使用的檢測抗體(ti) 及捕獲抗體(ti) 不匹配，而不被檢測出。

操作安全須知:

1) 所有的化學試劑理應被認為(wei) 具有潛在危害,任何的操作都必須提前做好實驗防護。在操作試劑盒或處理樣本的區域請不要飲食。

2) 推薦隻有經過良好實驗室培訓的工作人員方可操作本試劑盒。操作時請佩戴合適的防護設施，例如白大衣、實驗手套、安全眼鏡等。

3) 請不要讓試劑或樣本接觸皮膚、眼睛和粘膜等身體(ti) 部位。如不慎接觸，請立即用大量清水清洗。

4) 試劑盒中的終止液為(wei) 酸性溶液，在使用終止液時，請佩戴防-護服，做好防護眼睛、手及麵部等的措施。 

5)檢測必須符合實驗室管理規範的規定，嚴(yan) 格防止交叉汙染，所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應按照實驗室規定進行處置，嚴(yan) 禁隨意丟(diu) 棄。

6)試劑盒的液體(ti) 組分中，含有防腐劑，可能引起皮膚過敏反應，避免吸入煙霧或與(yu) 皮膚接觸。底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入煙霧。戴上防護手套，實驗完成後徹-底洗手。

免責聲明

1.   試劑盒僅(jin) 供研究使用，不得用於(yu) 臨(lin) 床實驗或人體(ti) 實驗，否則所產(chan) 生的一切後果，由實驗者承擔，本公司概不負責。

2.   嚴(yan) 格按照說明書(shu) 中標明的時間、加液量及順序進行操作，實驗者違反說明書(shu) 操作，後果由實驗者承擔。

大鼠N端前腦鈉素ELISA檢測試劑盒