Tris-氯化銨紅細胞裂解液

Tris-氯化銨紅細胞裂解液

【產(chan) 品名稱】 ：Tris-氯化銨紅細胞-裂解液

【產(chan) 品規格】 ：100ml /500ml

【儲(chu) 存條件】 ：4℃

【有效期】 ：12個(ge) 月 

【產(chan) 品簡介】 ：

在生物科研領域，經常需要去除紅細胞，去除紅細胞的方法有多種，如 ACK Lysis Buffer、Tris-氯化銨紅細胞-裂解液、Gey's Lysis Buffer。Tris-氯化銨紅細胞-裂解液(Tris-NH4Cl Red Blood Cell Lysis Buffer)，也稱為(wei) Tris-NH4Cl Lysis Buffer，是一種從(cong) 人、鼠 或其他哺乳動物等體(ti) 內(nei) 的組織樣品或血液中裂解並去除無核紅細胞的溶液，其主要有效成分為(wei) NH4Cl。

Tris-NH4Cl Lysis Buffer 經過優(you) 化配方，在裂解無核紅細胞的同時幾乎不損傷(shang) 淋巴細胞(Lymphocyte)或其它有細胞核的細胞。本裂解液經過濾除菌，經過 Tris-NH4Cl Lysis Buffer 處理過的血液或組織細胞樣品可以用於(yu) 後續的細胞培養(yang) 、細胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規的分析和檢測。

本產(chan) 品僅(jin) 供科研實驗用，不做其它用途！

【自備材料】 ：

胰蛋-白酶、離心機、PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yang) 液、胎牛血清

【操作步驟】(僅(jin) 供參考)：

(一)組織細胞樣本的常規操作

1、製備細胞懸液: 新鮮組織經過胰蛋-白酶或膠原酶等消化處理，通過適當方法製備成細胞 懸液，離心棄上清。

2、裂解: 加入 3～5 倍細胞沉澱體(ti) 積的 Tris-NH4Cl Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解 1～2min。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。

3、離心: 4℃，400～500g 離心 5min，棄紅色上清。如無低溫離心機，本步驟亦可在室溫下操作。

如果發現紅細胞裂解不wan全，可以重複上述步驟 2 和步驟 3 各一次。

洗滌：根據實驗要求加入適量 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yang) 液，輕柔混勻重懸沉澱。4℃，400～500g 離心 2～3min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yang) 液的量一般應大於(yu) 細胞沉澱體(ti) 積的 5 倍以上。

如有必要，重複上述步驟 5 一次，共洗滌 1～2 次。

根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉澱，進行計數、培養(yang) 等後續實驗。

(二)組織細胞樣本的快速操作(無需洗滌)

1、製備細胞懸液：新鮮組織經過胰蛋-白酶或膠原酶等消化處理，通過適當方法製備成細胞懸液，離心棄上清。

2、裂解：加入細胞 5 倍細胞沉澱體(ti) 積的 Tris-NH4Cl Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解 1～2min。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。

3、加入 15～20ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yang) 液，輕柔混勻。

4、離心：4℃，400～500g 離心 5min，棄紅色上清，本離心步驟亦可在室溫下操作。

5、如果發現紅細胞裂解不wan全，可以重複上述步驟 2～4 各一次。

6、根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉澱，進行計數、培養(yang) 等後續實驗。

(三)血液樣本的常規操作

1、取新鮮抗凝血，400～500g 離心 5min，棄上清。

2、裂解: 加入 6～10 倍細胞沉澱體(ti) 積的 Tris-NH4Cl Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解 1～5min。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。(特別提醒：對於(yu) 鼠的血液，裂解 1～2min 已經足夠，對於(yu) 人的外周血，宜延長裂解時間至 4～5min，並且裂解過程中輕輕搖動以促進紅細胞裂解。)

3、離心: 4℃，400～500g 離心 5min，棄紅色上清。如無低溫離心機，本步驟亦可在室溫下操作。

4、如果發現紅細胞裂解不wan全，可以重複上述步驟 2 和步驟 3 一次。

5、洗滌: 根據實驗要求加入適量 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yang) 液，輕柔混勻重懸沉澱。4℃，400～500g 離心 2～3min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yang) 液的量一般應大於(yu) 細胞沉澱體(ti) 積的 5 倍以上。

6、根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉澱，進行計數、培養(yang) 等後續實驗。

注意：對於(yu) 微量或少量的血液樣本，可以不用第 1 步操作，可直接加入 10 倍血液體(ti) 積的 Tris-NH4Cl Lysis Buffer 進行第 2 步操作，並在 4℃或室溫裂解 4～15min。對於(yu) 鼠的血液，裂解 4～5min 已經足夠； 對於(yu) 人的外周血，宜延長裂解時間至 10min，但通常不宜超過 15min，並且裂解過程中宜適當搖動以促進紅細胞裂解。

(四)血液樣本的快速操作(無需洗滌)

1、新鮮抗凝血中加入10 倍體(ti) 積的Tris-NH4Cl Lysis Buffer，輕輕吹打混勻，裂解4～15min。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。（特別提醒：對於(yu) 鼠的血液，裂解4～5min 已經足夠，對於(yu) 人的外周血，宜延長裂解時間至 10min，但通常不宜超過 15min，並且裂解過程中宜適當搖動以促進紅細胞裂解。）

2、加入 20～30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yang) 液，輕柔混勻。

3、400～500g 離心 5min，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

4、如果發現紅細胞裂解不wan全，可以重複上述步驟 2 和步驟 3 一次。

5、根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉澱，進行計數、培養(yang) 等後續實驗。

【注意事項】 ：

1、製備細胞懸液時應根據實驗需要，不一定要製備成單細胞懸液。

2、後續試驗如果是用於(yu) 細胞培養(yang) ，操作過程中應注意無菌操作，盡量在超淨工作台內(nei) 操作。

3、離心步驟盡量在 4℃離心機上操作。

4、常規步驟與(yu) 快速步驟的區別在於(yu) ：常規步驟多了一步洗滌過程的離心，可以節省洗滌液的用量，並且洗滌效果也更好，不需要大體(ti) 積的離心管；快速步驟少了一次離心過程，洗滌效果略差一些，同時需要大體(ti) 積的離心管。

5、離心洗滌後，通常極微量的紅細胞不會(hui) 影響後續的檢測。

6、為(wei) 了您的安全和健康，請穿實驗服並戴一次性手套操作。

Tris-氯化銨紅細胞裂解液