SP免疫組化試劑盒，免疫組化試劑盒

所有產(chan) 品僅(jin) 供科研使用，不能用於(yu) 食用和醫療等

SP免疫組化試劑盒，免疫組化試劑盒

SP(小鼠/兔IgG)-POD Kit 說明書(shu)
產(chan) 品內(nei) 容：
封閉液（正常山羊血清） 10ml
3% H2O2 10ml
Bio-羊抗小鼠/兔IgG 濃縮液200ul
鏈酶親(qin) 和素-POD 濃縮液100ul
稀釋液         30ml
20×DAB 顯色液A 1ml
20×DAB 顯色液B 1ml

保存：
如果長時間不使用，請將所有試劑存放於(yu) -20℃，如經常使用，可將封閉液，3% H2O2 和20×DAB
顯色液B 存放於(yu) 2-8℃以方便使用。

SP免疫組化試劑盒，免疫組化試劑盒

產(chan) 品說明：
本試劑盒適合於(yu) 一抗為(wei) 小鼠/兔IgG 的免疫組化實驗DAB 顯色。
SP 試劑盒是專(zhuan) 為(wei) 免疫組化和其他免疫檢測而設計的，用以顯示組織和細胞中抗原分布。鏈黴親(qin)
和素(StreptAvidin)是一種從(cong) 鏈黴菌中提取的蛋白質，同親(qin) 和素一樣，對生物素有*的親(qin) 和力，親(qin)
和素是一個(ge) 堿性蛋白質（PI=10），經改造後可以轉變成中性蛋白質。鏈黴親(qin) 和素等電點接近中性，
對組織和細胞的非特異吸附很低，因此基於(yu) 鏈黴親(qin) 和素的免疫組化方法背景很低。
操作步驟:（以石蠟切片為(wei) 例）
1. 切片常規脫蠟至水(三次二甲苯，三次乙醇)。
2. 3% H2O2 室溫處理5-10 分鍾以滅活內(nei) 源性酶。蒸餾水洗3 次。
3.可選步聚：
a、熱修複抗原，將切片浸入0.01M 檸檬酸鈉緩衝(chong) 液（PH6.0），電爐或微波爐加熱至沸騰後斷電，
間隔5-10 分鍾後，反複1-2 次。冷卻後PBS（pH7.2-7.6）洗滌1-2 次。
b、酶消化，滴加消化液，37℃10 分鍾，PBS（pH7.2-7.4）洗滌2-3 次。
c、跳過此步，直接進入下一步。
4. 滴加封閉液，室溫20 分鍾。甩去多餘(yu) 液體(ti) ，免洗。
5. 用稀釋液將一抗按一定比例稀釋（稀釋後的一抗4℃可保存一周），也可另行購買(mai) 抗體(ti) 稀釋液。
滴加稀釋的一抗37℃ 孵育1 小時左右或20℃ 2 小時左右，也可4℃過夜。PBS（pH7.2-7.4）洗滌3
次，每次2 分鍾。（一抗的稀釋度、孵育時間和溫度與(yu) 染色強度、背景有直接關(guan) 係。一般來說，陽
性染色強度不夠時，可提高一抗濃度和延長孵育時間；背景過高時，可降低一抗濃度和縮短孵育時
間。）
6． 根據用量，用稀釋液將Bio-羊抗小鼠/兔IgG 濃縮液按1:100 稀釋成工作液(1ml 稀釋液加入10ul
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Bio-羊抗小鼠/兔IgG 濃縮液混勻，此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗小鼠/兔IgG 工作液，
20-37℃ 孵育30 分鍾。PBS（pH7.2-7.4）洗滌3 次，每次2 分鍾。
7．根據使用量，用稀釋液將鏈酶親(qin) 和素-POD 濃縮液按1:100 稀釋成工作液(1ml 稀釋液加入10ul
鏈酶親(qin) 和素-POD 濃縮液混勻，此工作液4℃可保存一周)。滴加鏈酶親(qin) 和素-POD 工作液，20-37℃，
30 分鍾。PBS （pH7.2-7.4）洗滌4 次，每次5 分鍾。
8．DAB 顯色：根據用量，用PBS（pH7.2-7.4）配製，按1ml PBS 加入50ul 20×DAB 顯色液A，加
入50ul 20×DAB 顯色液B 。充分混勻後滴加到切片上。室溫顯色，鏡下控製反應時間，一般在5-30
分鍾之間。蒸餾水洗滌終止反應。
9．蘇木素輕度複染。脫水，透明，封片。顯微鏡觀察。
對於(yu) 細胞爬片，固定後，PBS 漂洗兩(liang) 次，再用0.5% Triton X-100 室溫孵育20 分鍾，PBS 漂洗
兩(liang) 次，3% H2O2 處理15 分鍾；PBS 漂洗兩(liang) 次，接上述第4 步。
對於(yu) 冰凍切片，固定後，PBS 漂洗兩(liang) 次，接上述第二步。
注意事項：
如果染色背景過高，在SP 反應之後，DAB 顯色之前，用加有0.01—0.02% TWEEN-20 的PBST
（pH7.2-7.4）洗滌切片4 次，PBS 洗2 次，然後DAB 顯色。