RT-PCR檢測服務，實時熒光定量PCR檢測服務

RT-PCR檢測服務，實時熒光定量PCR檢測服務

上海信帆生物專(zhuan) 業(ye) 代做RT-PCR實驗，熒光定量PCR技術是普通PCR技術的改良和發展，它提高了普通PCR技術的特異性和準確性，能做到實時監控和準確定量，廣泛應用於(yu) 基礎研究、研究檢驗、海關(guan) 商貿檢疫等各個(ge) 領域。

1.技術優(you) 勢：

*靈敏度高，可以檢測低拷貝的目的基因

*高精度，PCR擴增階段包括3個(ge) 階段：指數增長期，線性增長期和平台期，96個(ge) 重複指數增長期表現出高精度，而平台期則變化差異較大

*定量能力強，簡單的流程就能得到高質量的定量數據

*動力學範圍寬，可以定量9個(ge) 數量級的差異，速度快，節省時間和勞力，不需要電泳檢測
*安全，使用熒光染料發光，不用EB或放射性物質，極大降低對實驗人員健康的威脅
*重複性好

2.檢測方法

 (1) SYBR Green Ⅰ

   遊離狀態下的SYBR Green分子發出微弱的熒光信號，當與(yu) dsDNA雙螺旋小溝區域結合時，則發出綠色熒光，可在520nm波長下檢測熒光信號，熒光信號的強度與(yu) dsDNA數量呈正相關(guan) 。

SYBR Green Ⅰ染料法的特點：

   高靈敏度，低背景信號，操作簡單，不影響酶促反應，價(jia) 格便宜。

(2)探針法：TaqMan熒光探針，MGB探針

  TaqMan 熒光探針是一種寡核苷酸探針，熒光基團連接在探針的5`末端，一般用FAM、VIC、HEX、Cy3、Cy5等熒光基團，而淬滅劑則在3`末端，一般為(wei) TAMRA、BHQ1、BHQ2等，其中TAMRA發出黃色熒光，BHQ1和BHQ2不發出熒光。PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個(ge) 特異性的熒光探針，探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從(cong) 而熒光監測係統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個(ge) 熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與(yu) PCR產(chan) 物形成*同步。

  TaqMan-MGB探針與(yu) 普通TaqMan熒光探針相比具有更短的序列和更高的序列特異性，常被用於(yu) SNP分型的研究中，有望成為(wei) 基因診斷和個(ge) 體(ti) 化用藥分析的技術平台。

  RT-PCR檢測服務，實時熒光定量PCR檢測服務

探針法的特點：

  與(yu) 染料法相比具有更低的背景信號，更高的靈敏度，可以檢測低於(yu) 10個(ge) 分子的模板，更高的特異性，結果也更準確。同時也具有染料法的操作簡單，不影響酶促反應等優(you) 點。

3.檢測周期
常規檢測任務2－3周內(nei) 完成，具體(ti) 時間根據要檢測的基因和樣本數而定

4.報告內(nei) 容

提供電泳圖片，引物調試與(yu) 樣本擴增相關(guan) 圖片（擴增曲線/溶解曲線/標準曲線），定量PCR導出的原始數據，結果的初步匯總分析以及實驗報告；

5.送樣要求

1、組織樣本在取樣後，迅速放入Trizol或RNA保存液中；

2、細胞請用培養(yang) 基,Trizol或RNA保存液；

3、RNA保存液保存的樣本可冰袋運輸；其它保存條件請幹冰運輸。

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