白介素10(IL-10)ky体育在线登陆檢測前準備工作
白介素10(IL-10)ky体育在线登陆檢測之前需要做哪些準備工作?下麵就讓小編帶您做個簡單的了解。
1.試劑盒自冰箱中取出後應置室溫平衡20分鍾;每次檢測後剩餘試劑請及時於2~8℃保存。
2.將濃縮洗滌液用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加19份水)。
3.標準品:加入標準品稀釋液0.25ml至凍幹標準品瓶中使IL-1β終濃度達到250pg/ml,靜置15分鍾後輕輕混懸待*溶解,用標準品稀釋液倍比梯度稀釋後依次加入檢測孔中。(標準曲線取七個點,zui高濃度為250pg/ml,標準品稀釋液直接加入作為0濃度.)
白介素10(IL-10)ky体育在线登陆洗滌方法:
自動洗板機或人工洗板:每孔洗滌液為300ul,注入與吸出間隔15-30秒。洗板5次。zui後一次洗板完成後將板倒扣著在厚吸水紙上用力拍幹。
實驗過程需自備的材料:
1.不同規格的加樣槍及相應的槍頭;2.酶標儀;3.自動洗板機;4.去離子水或雙蒸水;
白介素10(IL-10)ky体育在线登陆操作步驟:
1.通過計算並確定一次性實驗所需的板條數,取出所需板條放置在框架內,暫時用不到板條請放回鋁箔袋密封,保存於4℃。
2.建議設置本底較正孔,即空白孔,設置方法為該孔隻加TMB顯色液和中止液。每次實驗均需做標準品對照並畫出標準曲線。
3.分別將標本或不同濃度標準品(100ul/孔)加入相應孔中,用封板膠紙封住反應孔,室溫孵育120分鍾。對於血清或血漿標本,請加入50ul樣本分析緩衝液後加50ul標本,如稀釋量大,請將樣本與樣本分析緩衝液等量加入,不足部分用標準品稀釋液補充至100ul。
4.洗板5次,且zui後一次置厚吸水紙上拍幹。
5.加入生物素化抗體工作液(100ul/孔)。用封板膠紙封住反應孔,室溫孵育60分鍾。
6.洗板5次,且zui後一次置厚吸水紙上拍幹。
7.加入酶結合物工作液(100ul/孔)。用封板膠紙封住反應孔,避光室溫孵育20分鍾。
8.洗板5次,且zui後一次置厚吸水紙上拍幹。
9.加入顯色劑TMB100ul/孔,避光室溫孵育20分鍾。
10.加入終止液50ul/孔,混勻後即刻測量OD450值。