上海信帆生物代理銷售內(nei) 毒素試劑盒-鱟試劑法，現貨供應，歡迎大家！

【用途】顯色基質鱟試劑 ( Chromogenic End-point Tachypleus Amebocyte Lysate , CE TAL )用於(yu) 體(ti) 外細菌內(nei) 毒素的定量檢測，禁止以任何途徑進入機體(ti) 。

【原理】鱟試劑為(wei) 鱟科動物東(dong) 方鱟的血液變形細胞溶解物的冷凍幹燥品,鱟試劑中 含有Ｃ因子、Ｂ因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在適宜的條件下（溫 度，pH 值及無幹擾物質），細菌內(nei) 毒素激活 C  因子，引起一係列酶促反應， 激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解人工合成的顯色基質，使其分解為(wei)  多肽和黃色的對硝基苯胺（pNA，λmax = 405nm） 。在一定時間內(nei) ，pNA 的 生成量與(yu) 細菌內(nei) 毒素濃度成正相關(guan) ，據此，可以定量供試品的內(nei) 毒素濃度。 同時，對硝基苯胺（pNA）也可用偶氮化試劑染成玫瑰紅色（λmax = 545nm）， 避免了供試品本身的顏色對 405nm 處吸收峰的幹擾。

【檢測限】按反應時間不同可檢測 0.1EU/ml-1 EU/ml 和 0.01EU/ml -0.1EU/ml 兩(liang) 個(ge) 區 間(  反應時間 T 1  和 T 2  見出廠檢驗報告)  。

【試劑盒組成】

細菌內(nei) 毒素工作品，5 支  鱟試劑， 1.7ml/支，5 支 顯色基質，1.7ml/支，5 支 偶氮化試劑 1，10ml/支，5 支 偶氮化試劑 2，10ml/支，5 支 偶氮化試劑 3，10ml/支，5 支  HCl (反應終止劑)， 50ml/瓶，1 瓶

細菌內(nei) 毒素檢查用水，50ml/瓶，3 瓶

【貯存】陰涼處,  * 2-8℃,避光貯存。

內(nei) 毒素試劑盒-鱟試劑法，現貨供應

【用法】

1 .材料和設備

1.1  試劑

鱟試劑、細菌內(nei) 毒素工作品、顯色基質、偶氮化試劑 1  、偶氮化試劑 2  、偶氮化試 劑 3、HC l (  反應終止劑)  、細菌內(nei) 毒素檢查用水。

1.2 器材

無熱原試管、無熱原吸頭。

旋渦混合儀(yi) 、移液器、多道移液器、封口膜、試管架。 恒溫水浴箱（37±1℃）、分光光度計。

注意：接觸試劑及供試品的所有器皿必須是無熱原的(我公司提供無熱原耗材)。

玻璃器皿可經 250℃幹烤至少 60 分鍾去除熱原。 2.  供試品的貯存與(yu) 預處理

備注：   若供試品為血液類，請參照我廠配套血液相關處理試劑使用說明書。

2.1 供試品的 pH 值應在 6 - 8 之間，若超出此範圍，需用無熱原緩衝(chong) 液、0.1N 氫氧化鈉 或 0.1N 鹽酸調節。

2.2  若供試品中可能存在鱟實驗的幹擾物質，處理參見【供試品的幹擾試驗】。

2.3 若供試品中可能含有β－葡聚糖（β－葡聚糖會(hui) 產(chan) 生 G 因子旁路反應，幹擾內(nei) 毒素 檢測），需選用特異性鱟試劑（我公司提供）。

2.4   若供試品為(wei) 一些抗菌素如頭孢類抗菌素和磺胺製劑會(hui) 對偶氮染色劑產(chan) 生偶聯反應 而幹擾偶氮化顯色，需要選用不含偶氮化試劑的試劑盒（我公司提供）。

2.5 若供試品的本底吸光度值大於(yu)  0.5,必須對供試品進行稀釋後再檢測。

2.6   若供試品顏色較深(例如溶血)，或在酸性條件下顏色加深(例如一些組織培養(yang) 介質), 必須設置供試品空白管以扣除供試品自身的顏色本底。 供試品空白管不加入鱟試劑，以等體(ti) 積鱟試劑的溶劑(該處為(wei) 細菌內(nei) 毒素檢查用水) 代替。其餘(yu) 操作同供試品管。

3.實驗操作

3.1 細菌內(nei) 毒素標準溶液配製

標準曲線所采用的內(nei) 毒素濃度可以為(wei)  0.01, 0.025, 0.05, 0.1 EU/ml 或 0.1, 0.25, 0.5,1.0

EU/ml。稀釋方法如下（以 0.1, 0.25, 0.5, 1.0 EU/ml 為(wei) 例）：取細菌內(nei) 毒素工作品 1 支，按細菌內(nei) 毒素工作品使用說明書(shu) 稀釋為(wei)  10EU/ml 的內(nei) 毒素溶液，再稀釋為(wei)  1.0EU/ml 的內(nei) 毒素溶液，以 1.0EU/ml 的內(nei) 毒素溶液為(wei) 母液按下表稀釋成 0.1,0.25,

0.5, 1.0 EU/ml 的濃度梯度。配製好的內(nei) 毒素標準溶液應在 4 小時內(nei) 用完。

3.2 陰性對照為(wei) 細菌內(nei) 毒素檢查用水。

試劑：按標示量加細菌內(nei) 毒素檢查用水於(yu) 鱟試劑中，輕輕振搖使鱟試劑*溶解, 注意不要用旋渦混勻儀(yi) 激烈振搖。溶解的鱟試劑應在 10 分鍾內(nei) 用完。 顯色基質：按標示量加細菌內(nei) 毒素檢查用水於(yu) 顯色基質中，輕輕振搖使顯色基質 *溶解。顯色基質溶液可在無汙染的條件下於(yu)  4  ºC 貯存 8 小時以內(nei) 。 

偶氮化試劑 1：按標示量加反應終止劑鹽酸於(yu) 偶氮化試劑 1 中，

偶氮化試劑 2：按標示量加細菌內(nei) 毒素檢查用水於(yu) 偶氮化試劑 2 中， 

偶氮化試劑 3：按標示量加細菌內(nei) 毒素檢查用水於(yu) 偶氮化試劑 3 中，

 偶氮化試劑溶液可於(yu)  4ºC 貯存 1 周。

3.4 實驗操作

取無熱原試管，加入 100μl 細菌內(nei) 毒素檢查用水、內(nei) 毒素標準溶液，或供試品。

再加入 100μl 鱟試劑溶液，混勻，37ºC 溫育 T1 分鍾。 溫育結束，加入 100μl 顯色基質溶液，混勻，37ºC 溫育 T2 分鍾。 溫育結束，加入 500μl 偶氮化試劑 1 溶液，混勻，

加入 500μl 偶氮化試劑 2 溶液，混勻

加入 500μl 偶氮化試劑 3 溶液，混勻，靜置 5 分鍾，於(yu)  545nm 波長處讀取吸光度 值。(見表２)

表 2  實驗操作

4.數據處理

建立標準曲線：Y = b X + a，其中

Y 為(wei)  545nm 處吸光度值，X 為(wei) 內(nei) 毒素的濃度，b 為(wei) 直線斜率，a 為(wei)  Y 軸截距。 當實驗數據同時滿足如下三個(ge) 條件時實驗才有效： 1.標準曲線的相關(guan) 係數 r≥ 0.980，

2.標準曲線zui低點的 Y 值大於(yu) 陰性對照的 Y 值，

3.供試品平行管的平均值在標準曲線的區間內(nei) 。

【供試品的幹擾試驗】

供試品的幹擾試驗詳見《中華人民共和國藥典》2005  版中《細菌內(nei) 毒素檢查法》的 “光度測定法幹擾試驗”。當鱟試劑、供試品的來源、配方、生物試劑工藝改變或試驗 環境中發生了任何有可能影響試驗結果的變化時，須進行幹擾試驗,步驟如下:

1  選擇標準曲線中點或一個(ge) 靠近中點的內(nei) 毒素濃度（設為(wei)  λm），作為(wei) 供試品幹擾 試驗中添加的內(nei) 毒素濃度，配製含 λm 內(nei) 毒素的供試品陽性對照，測量出該溶液 的內(nei) 毒素濃度,稱為(wei)  Cs；

2  測量出未添加外源內(nei) 毒素的供試品溶液內(nei) 毒素濃度,稱為(wei)  Ct；

3  計算該試驗條件下的回收率 R＝（Cs–Ct）/λm×100%

4  當 R 在 50%～200%之間，則認為(wei) 在此試驗條件下供試品溶液不存在幹擾作用。

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