小鼠基質金屬蛋白酶elisa試劑盒也太好用了吧

小鼠基質金屬蛋白酶9(MMP-9)elisa試劑盒基本信息

MMPs幾乎能降解ECM中的各種蛋白成分,破壞腫瘤細胞侵襲的組織學屏障，在腫瘤侵襲轉移中起關(guan) 鍵性作用，從(cong) 而在腫瘤浸潤轉移中的作用日益受到重視，被認為(wei) 是該過程中主要的蛋白水解酶。目前MMPs家族已分離鑒別出26個(ge) 成員，編號分別為(wei) MMP1～26。根據作用底物以及片斷同源性，將MMPs分為(wei) 6類，為(wei) 膠原酶、明膠酶、基質降解素、基質溶解素、furin活化的MMP和其他分泌型MMP。Ⅳ型膠原酶為(wei) 其中重要的一類，它主要有兩(liang) 種形式，一種被糖化，分子量為(wei) 92kD，命名為(wei) MMP-9;另一種非糖化，分子量為(wei) 72kD，被稱為(wei) MMP-2。當前對MMP-2，MMP-9的研究較深入。MMP-2基因位於(yu) 人類染色體(ti) 16q21，由13個(ge) 外顯子和12個(ge) 內(nei) 含子所組成，結構基因總長度為(wei) 27kb，與(yu) 其他金屬蛋白酶不同，MMP-2基因5’旁側(ce) 序列促進子區域含有2個(ge) GC盒而不是TATA盒。活化的MMP-2定位於(yu) 細胞穿透基質的突出部位，估計其在酶解細胞間基質成分及基底膜的主要成分Ⅳ型膠原中有“鑽頭”的作用。

小鼠基質金屬蛋白酶9(MMP-9)elisa試劑盒操作方法簡介

實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測範圍。

1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，餘(yu) 孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加於(yu) 酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鍾。

為(wei) 保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.棄去液體(ti) ，甩幹，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體(ti) 工作液 100μl（取1μl生物素標記抗體(ti) 加99μl生物素標記抗體(ti) 稀釋液的比例配製，輕輕混勻，在使用前一小時內(nei) 配製），37℃,60分鍾。

3. 溫育60分鍾後，棄去孔內(nei) 液體(ti) ，甩幹，洗板3次，每次浸泡1-2分鍾，350μl/每孔，甩幹。

4.每孔加辣根過氧化物酶標記親(qin) 和素工作液（同生物素標記抗體(ti) 工作液） 100μl，37℃，60分鍾。

5. 溫育60分鍾後，棄去孔內(nei) 液體(ti) ，甩幹，洗板5次，每次浸泡1-2分鍾，350μl/每孔，甩幹。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鍾內(nei) ，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，後3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與(yu) 底物液的加入順序相同。為(wei) 了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到後應盡快加入終止液。

8. 用酶聯儀(yi) 在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液後15分鍾以內(nei) 進行檢測。

購買(mai) 我司elisa試劑盒可以提供免費代測服務，客戶準備好樣本，上海和南京地區的客戶可以提供免費上門取樣服務。其他地區的客戶，樣本用泡沫箱子包好，放幹冰或者冰袋寄送給我們(men) 。代測時間為(wei) 5到7個(ge) 工作日提供原始數據，分析數據， 實驗操作步驟以及實驗所用儀(yi) 器。