elisa試劑盒夾心法的來由

elisa試劑盒的夾心法，是一種很常規的檢測方法。它是怎麽(me) 樣工作的，原理，操作又是如何呢？？

1。在檢測之前，兩(liang) 種抗體(ti) 都應該被純化，並且必須被標記。
2。對於(yu) 大多數應用程序，一個(ge) 聚氯乙烯（PVC）微孔板是的；然而，參考製造商的指南來決(jue) 定蛋白質的結合板的zui合適的類型。
三.每口井加入約50μL抗體(ti) 溶液（PBS中的20μg/L），將未標記的抗體(ti) 與(yu) 每個(ge) 井的底部結合。聚氯乙烯將綁定約100納克/井（300毫微克/平方厘米）。使用的抗體(ti) 的數量將取決(jue) 於(yu) 個(ge) 別化驗，但如果需要zui大結合，使用至少1μg /井。這是遠遠高於(yu) 能力的井，但綁定將發生更迅速，並結合溶液可以保存和再次使用
4。培養(yang) 板在4°C允許完整的結合。
5。用PBS清洗酶標板兩(liang) 次。500毫升噴瓶方便。抗體(ti) 溶液衝(chong) 洗可以把板在合適的容器中刪除。
6。其餘(yu) 位點的蛋白結合在微孔板必須用封閉液孵育飽和。用3%的威爾斯/ PBS與(yu) 0.02%*填充到頂部。孵化2小時通宵在室溫空氣潮濕。
注意：*是一種抑製劑或辣根過氧化物酶。如果HRP標記的抗體(ti) 將用於(yu) 檢測，不包括*在緩衝(chong) 液或洗滌溶液中。
7。用PBS清洗酶標板兩(liang) 次。
8。添加50μL抗原解酶標板（抗原溶液應滴定）。所有的稀釋液應在緩衝(chong) 完成（3%牛血清白蛋白/ PBS）。放置至少2小時，在潮濕空氣中室溫
9。用PBS洗盤子四次。
10、添加標記的第二抗體(ti) 。在初步實驗中可以確定添加量。為(wei) 了準確定量，第二抗體(ti) 應過量使用。所有的稀釋液應在緩衝(chong) 了。
11。潛伏在潮濕的氣氛中室溫2小時或更多。
12、用PBS的幾種變化清洗。
13、添加基材如製造商指示。經過建議的孵育時間已經過去，在目標波長的光學密度，可以測量在ELISA板閱讀器。
注意：由於(yu) 潛在致癌性，一些酶底物被認為(wei) 是有害的。妥善處理，並參考材料安全數據表，以妥善處理預防措施。