ELISA實驗代測全麵普及

elisa試驗是一種敏感性高，特異性強，重複性好的實驗診斷方法。由於(yu) 其試劑穩定、易保存，操作簡便，結果判斷較客觀等因素，已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。ELISA檢測試劑盒是用於(yu) 體(ti) 外定性檢測科研血清或血漿中的抗人類戊型肝炎（HEV）病毒 IgM 抗體(ti) ELISA檢測。

　ELISA的基礎是抗原或抗體(ti) 的固相化及抗原或抗體(ti) 的酶標記。結合在固相載體(ti) 表麵的抗原或抗體(ti) 仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體(ti) 既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體(ti) 或抗原）與(yu) 固相載體(ti) 表麵的抗原或抗體(ti) 起反應。用洗滌的方法使固相載體(ti) 上形成的抗原抗體(ti) 複合物與(yu) 液體(ti) 中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體(ti) ，也通過反應而結合在固相載體(ti) 上。此時固相上的酶量與(yu) 標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物後，底物被酶催化成為(wei) 有色產(chan) 物，產(chan) 物的量與(yu) 標本中受檢物質的量直接相關(guan) ，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由於(yu) 酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。 ELISA可用於(yu) 測定抗原，也可用於(yu) 測定抗體(ti) 。

　　然而，影響Elisa試驗結果的因素很多，故加強各個(ge) 環節的質量保證才能充分發揮其方法學的優(you) 點。

Elisa試劑盒測定技術的發展

　　研究測定技術的發展主要在於(yu) 方法學的發展，而方法學的發展依托於(yu) 試劑生物試劑技術不斷進步更新和型標記物的應用。目前，分子生物學正在並zui終肯定會(hui) 讓我們(men) 對整個(ge) 生命科學有一個(ge) 全麵而*的認識，其對免疫測定技術發展的影響也是直接而又有效的，它使我們(men) 對以前一些難以檢測的生物活性物質的測定變得輕而易舉(ju) ，並且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。

基因工程試劑對免疫測定技術發展的影響

　　免疫測定技術的基礎在於(yu) 抗原抗體(ti) 之間的特異結合反應，所以任何的診斷試劑離不開的原料，如抗原抗體(ti) ，酶等。以前用於(yu) 免疫測定的抗原通常為(wei) 各種純化抗原，而抗體(ti) 則為(wei) 純化抗原免疫動物後獲得的多克隆抗體(ti) 和使用雜交瘤技術得到的單克隆抗體(ti) ，而抗原或抗體(ti) 的標記物如酶標結合物則通過各種化學合成方法製備。近年來，隨著分子生物學的發展，使用基因工程方法製備各種特殊的抗原或抗體(ti) 及其酶結合物等免疫測定試劑幾成為(wei) 現實的新一代試劑，各種新型使用的測定方法也不斷出現。

　　HBsAg試劑特點（檢測模式：研究抗體(ti) 夾心法）：包被抗體(ti) 為(wei) 山羊多抗。多抗具有高親(qin) 和性和對抗原各種表位的反應性。酶表抗體(ti) 為(wei) 與(yu) HBsAg有不同結合位點的鼠複合單位，可測得HBsAg變異樣品，提高檢測的特異性（99.98%）提高檢測的靈敏度，應用Parl Ehrich 學說（PEI）HBsAg標準品，對ad標準品的靈敏度為(wei) 0.05ng/ml對ay標準品靈敏度為(wei) 0.025ng/ml

 測試劑盒檢測原理

ELISA檢測試劑盒應用定性夾心免疫檢測技術，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段，分別來自於(yu) 該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標準品加入孔中並孵育，如果其中存在HEV IgM抗體(ti) ，這些抗體(ti) 就會(hui) 與(yu) HEV 的多肽抗原結合，並固定在上麵，洗板除去其它非特異性抗體(ti) 和樣品中的其它成份。然後加入羊抗人IgM-HRP（辣根過氧化物酶）酶結合物，經第二次孵育後，酶結合物就會(hui) 與(yu) *次孵育結合上的HEV IgM抗體(ti) 相結合，洗板除去未結合的酶結合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時會(hui) 發生酶-底物反應，隻有那些含有HEV IgM抗體(ti) 和酶結合物所形成的複合物的孔才會(hui) 發生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應，並在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgM抗體(ti) elisa試劑盒的測試標準, O.D.值大於(yu) 或等於(yu) Cut-Off值的樣品被認為(wei) 是初試陽性。

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