大鼠脂肪酸合成酶（FAS）elisa試劑盒的檢測技術

大鼠脂肪酸合成酶(FAS)elisa試劑盒基本信息

脂肪酸合成酶 fatty acid synthetase 乙酰CoA+7丙=酸CoA+14NADPH+14H+→棕櫚酸+7CO2+8CoA+14NADP++6H2O。催化上述反應的酶稱為(wei) 脂肪酸合成酶，不過酵母酶的zui終產(chan) 物是棕櫚酸CoA。如圖所示，在丙二酸基和乙酰基縮合時，在每次延長C2單位的同時發生還原反應，在這個(ge) 複雜的反應中，各有相應的酶參與(yu) 作用。而酰基以CoA轉移到酰基載體(ti) 蛋白（ACP）上，以與(yu) 此蛋白質結合的形態進行反應。通過如圖所示的反應反複進行可生成棕櫚酸。在大腸杆菌中，各部分反應的酶以及ACP是不結合在一起的，但在動物和酵母中，各種酶是結合型，形成所謂多酶複合體(ti) 。

大鼠脂肪酸合成酶(FAS)elisa試劑盒的檢測技術 

雙抗體(ti) 夾心法

　　1.　包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩衝(chong) 液將抗體(ti) 稀釋至蛋白質含量為(wei) 1～10μg/ml。在每個(ge) 聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nei) 溶液，用洗滌緩衝(chong) 液洗3次，每次3分鍾。（簡稱洗滌，下同）。

　　2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml於(yu) 上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然後洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。

　　3.　加酶標抗體(ti) ：於(yu) 各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(ti) （經滴定後的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。

　　4.　加底物液顯色：於(yu) 各反應孔中加入臨(lin) 時配製的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鍾。

　　5.　終止反應：於(yu) 各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

6.　結果判定：可於(yu) 白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內(nei) 顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為(wei) 無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀(yi) 上，於(yu) 450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零後測各孔OD值，若大於(yu) 規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為(wei) 陽性。

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