大鼠血管緊張素轉換酶（ACE）elisa試劑盒使用說明書

大鼠血管緊張素轉換酶(ACE)elisa試劑盒基本信息簡介

血管緊張素轉換酶是一種膜結合糖蛋白分子，測定方法是放射性同位素法。

中文名 血管緊張素轉換酶 特    性 是一種膜結合糖蛋白分子 測定方法 放射性同位素法 關(guan)    係 慢性阻塞性肺部疾病及肺心病。ACE 是一種膜結合糖蛋白分子量為(wei) 150000 含鋅屬二肽羧肽酶能使血管緊張素I(十肽由腎素轉化而來，肽鏈C 末端的組氨酸和亮氨酸殘基水解形成具有增壓作用的血管緊張素II(八肽) 。後者通過與(yu) 血管氣管平滑肌作用引起血管支氣管收縮ACE 也具有降血壓作用並參與(yu) 緩激肽P 物質等多肽性炎性物質的滅活ACE 。還能直接作用於(yu) 腎上腺皮質促進醛固酮分泌因此ACE 是腎素血管緊張素醛固酮係統以及緩激肽係統的重要調節因素，影響人體(ti) 多種生理機能ACE分布於(yu) 全身各組織以肺副睾睾丸zui高。其次為(wei) 十二指腸胰卵巢主動脈甲狀腺脾腎與(yu) 肝的含量甚微此外巨噬細胞單核細胞人胎膜胎盤羊水和臍靜脈血也含此酶各組織ACE主要定位於(yu) 毛細血管內(nei) 皮細胞由於(yu) 肺組織具有豐(feng) 富的血管床且肺毛細血管床內(nei) 皮細胞所含的ACE 位於(yu) 細胞外(外周血管床內(nei) 皮細胞所含的ACE 位於(yu) 細胞內(nei) ) 促使血管緊張素I 轉化為(wei) 血管緊張素II 的作用強且肺循環是體(ti) 內(nei) *不使血管緊張素II 滅活的血管床肺循環流出的血液中血管緊張素II 的含量zui高一般認為(wei) 血管內(nei) 皮細胞的ACE 與(yu) 胞膜密切結合幾乎不釋放ACE 而巨噬細胞和單核細胞產(chan) 生的ACE 大部分釋放入血故當ACE 升高時應考

慮為(wei) 巨噬細胞 單核細胞係統的分泌亢進多數報道血清ACE 活性無性別年齡吸煙體(ti) 位時間變化清醒睡眠狀態不影響ACE 的活性早產(chan) 兒(er) 足月兒(er) 新生兒(er) 及健康成人的血清ACE 活性無明顯差別但李平生等 Ucer G.報道ACE 活性男大於(yu) 女Ucer G.(1)等報道血清ACE 活性與(yu) 吸煙年齡性別有關(guan) ,與(yu) 氧分壓呈負性相關(guan) 。

大鼠血管緊張素轉換酶(ACE)elisa試劑盒基本信息檢測方法簡介

實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測範圍。

1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，餘(yu) 孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加於(yu) 酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鍾。

為(wei) 保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.棄去液體(ti) ，甩幹，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體(ti) 工作液 100μl（取1μl生物素標記抗體(ti) 加99μl生物素標記抗體(ti) 稀釋液的比例配製，輕輕混勻，在使用前一小時內(nei) 配製），37℃,60分鍾。

3. 溫育60分鍾後，棄去孔內(nei) 液體(ti) ，甩幹，洗板3次，每次浸泡1-2分鍾，350μl/每孔，甩幹。

4.每孔加辣根過氧化物酶標記親(qin) 和素工作液（同生物素標記抗體(ti) 工作液） 100μl，37℃，60分鍾。

5. 溫育60分鍾後，棄去孔內(nei) 液體(ti) ，甩幹，洗板5次，每次浸泡1-2分鍾，350μl/每孔，甩幹。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鍾內(nei) ，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，後3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與(yu) 底物液的加入順序相同。為(wei) 了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到後應盡快加入終止液。

8. 用酶聯儀(yi) 在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液後15分鍾以內(nei) 進行檢測。

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