白介素1α試劑盒檢測原理

人白介素1α(IL-1α)分析檢測試劑盒檢測原理:

白細胞介素-1，簡稱白介素1(IL-1)，是一種細胞因子，屬於(yu) 白細胞介素的一種。白細胞介素（interleukin，IL），簡稱白介素，是指在白細胞或免疫細胞間相互作用的淋巴因子。白細胞介素在傳(chuan) 遞信息，激活與(yu) 調節免疫細胞，介導T、B細胞活化、增殖與(yu) 分化及在炎症反應中起重要作用。

白介素1(IL-1)是一種多肽，分子質量為(wei) 17ku，有 IL-1a 及 IL-1β 兩(liang) 種亞(ya) 型。IL-1a由159個(ge) 氨基酸組成；IL-1β含153個(ge) 氨基酸；兩(liang) 者由不同的基因分別編碼。雖其氨基酸順序僅(jin) 有26％的同源性，然而IL-1a和IL-1β以同樣的親(qin) 和力結合於(yu) 相同的細胞表麵受體(ti) ，發揮相同的生物學作用。

IL-1受體(ti) （IL-1r）IL-1r幾乎存在於(yu) 所有有核細胞表麵，每個(ge) 細胞的IL-1r數目不等，少則幾十個(ge) （如t細胞），多則數千個(ge) （如成纖維細胞）。IL-1r主要有兩(liang) 種類型：一種為(wei) IL-1r1，其分子伸入胞漿內(nei) 的肽鏈部分較長，起著傳(chuan)

遞活化信號的作用；另一種為(wei) IL-1r2，胞內(nei) 部分的肽段較短，不能有效地傳(chuan) 遞信號，而是將胞外部分的肽鏈釋放到細胞外液中，以遊離形式與(yu) IL-1結合，發揮反饋抑製作用。gm-csf、g-csf及IL-1自身均可提高細胞IL-1r的表達水平，而tgf及皮質類固醇能降低IL-1r的表達。

本試劑盒采用雙抗體(ti) 夾心ELISA法。用抗人IL-1α抗體(ti) 包被於(yu) 酶標板上，實驗時樣品或標準品中的人IL-1α會(hui) 與(yu) 包被抗體(ti) 結合，遊離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IL-1α抗體(ti) 和辣根過氧化物酶標記的親(qin) 和素。抗人IL-1α抗體(ti) 與(yu) 結合在包被抗體(ti) 上的人IL-1α結合、生物素與(yu) 親(qin) 和素特異性結合而形成免疫複合物，遊離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現藍色，加終止液後變成黃色。用酶標儀(yi) 在450nm波長處測OD值，IL-1α濃度與(yu) OD450值之間呈正比，通過繪製標準曲線計算出樣品中IL-1α的濃度。

樣品收集:

1. 血清：全血樣品於(yu) 室溫放置2小時或4℃後於(yu) 1000×g離心20分鍾，取上清即可檢測，收集血液的試管應為(wei) 一次性的無熱原，無內(nei) 毒素試管。

2. 血漿：抗凝劑推薦使用EDTA-Na2，樣品采集後30分鍾內(nei) 於(yu) 1000×g離心15分鍾，取上清即可檢測。避免使用溶血，高血脂樣品。

3. 組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)衝(chong) 洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會(hui) 影響測量結果），稱重後將組織剪碎。將剪碎的組織與(yu) 對應體(ti) 積的PBS（一般按1:9的重量體(ti) 積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體(ti) 體(ti) 積可根據實驗需要適當調整，並做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑製劑）加入玻璃勻漿器中，於(yu) 冰上充分研磨。為(wei) 了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反複凍融。zui後將勻漿液於(yu) 5000×g離心5~10分鍾，

取上清檢測。

4. 細胞培養(yang) 上清：取細胞培養(yang) 上清於(yu) 1000×g離心20分鍾，除去雜質及細胞碎片。取上清檢測。

5. 其它生物樣品：1000×g離心20分鍾，取上清即可檢測

6. 樣品應清澈透明，懸浮物應離心去除。

7. 樣品收集後若在1周內(nei) 進行檢測的可保存於(yu) 4℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存於(yu) -20℃(1個(ge) 月內(nei) 檢測)，或-80℃（6個(ge) 月內(nei) 檢測），避免反複凍融。

8. 如果您的樣品中檢測物濃度高於(yu) 標準品zui高值，請根據實際情況，做適當倍數稀釋（建議先做預實驗，以確定稀釋倍數）。 試驗所需自備物品:

1. 酶標儀(yi) (450nm波長濾光片)

2. 高精度移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL

3. 37℃恒溫箱，雙蒸水或去離子水

4. 吸水紙  

檢測前準備工作:

1. 請提前20分鍾從(cong) 冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。

2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從(cong) 冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶，屬於(yu) 正常現象，可用40℃水浴微加熱使結晶*溶解後再配製洗滌液（加熱溫度不要超過50℃，使用時洗滌液應為(wei) 室溫）。當日使用。

3. 標準品: 於(yu) 10000×g離心1分鍾，加入標準品&樣品稀釋液1.0mL至凍幹標準品中，旋緊管蓋，靜置10分鍾，上下顛倒數次，待其充分溶解後，用移液器將其輕輕混勻（濃度為(wei) 250pg/mL）。然後根據需要進行倍比稀釋（注：不要直接在反應孔中進行倍比稀釋）。建議配製成以下濃度：250、125、62.5、31.25、15.625、7.813、3.906、0pg/mL，標準品&樣品稀釋液直接作為(wei) 空白孔0pg/mL。如配製125pg/mL標準品：取0.5mL250pg/mL的上述標準品加入含有0.5mL標準品&樣品稀釋液的EP管中，混勻即可，其餘(yu) 濃度依此類推。  

4. 生物素化抗體(ti) 工作液：實驗前計算當次實驗所需用量（以100μL/孔計），實際配製時應多配製100-200μL。使用前15分鍾，以生物素化抗體(ti) 稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體(ti) (1:100)成工作濃度。當日使用。

5. 酶結合物工作液：實驗前計算當次實驗所需用量（以100μL/孔計），實際配製時應多配製100-200μL。使用前15分鍾，以酶結合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結合物(1:100)成工作濃度。

當日使用。

標準品稀釋方法圖例：（以500μL/管為(wei) 例，也可根據實際用量來稀釋，如200μL/管）

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