消除組織培養汙染的小技巧

    當重要的培養(yang) 汙染時，研究者可能試圖消除或控製汙染。首先，確定汙染物是細菌、真菌、支原體(ti) 或酵母，把汙染細胞與(yu) 其它細胞係隔離開，用實驗室消毒劑消毒培養(yang) 器皿和超淨台，檢查HEPA過濾器。高濃度的抗生素和抗黴菌素可能對一些細胞係有毒性，因而，做劑量反應實驗確定抗生素和抗黴菌素產(chan) 生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩(liang) 性黴素B和抗黴菌素如泰樂(le) 菌素時尤其重要。下麵是推薦的確定毒性水平和消除培養(yang) 汙染的實驗步驟。

1）在無抗生素的培養(yang) 基中消化、計數和稀釋細胞，稀釋到常規細胞傳(chuan) 代的濃度。

2）分散細胞懸液到多孔培養(yang) 板中，或幾個(ge) 小培養(yang) 瓶中。在一個(ge) 濃度梯度範圍內(nei) ，把選擇抗生素加入到每一個(ge) 孔中。例如，兩(liang) 性黴素B推薦下列濃度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。

3）每天觀測細胞毒性指標，如脫落，出現空泡，匯合度下降和變圓。

4）確定抗生素毒性水平後，使用低於(yu) 毒性濃度2-3倍濃度的抗生素的培養(yang) 液培養(yang) 細胞2-3代。

5）在無抗生素的培養(yang) 基中培養(yang) 細胞一代。

6）重複步驟4。

7）在無抗生素的培養(yang) 基中培養(yang) 4-6代，確定汙染是否以已被消除。