TNF-a ELISA KIT*，腫瘤壞死因子a試劑盒*

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腫瘤壞死因子a定義(yi)

定義(yi) 1：主要由活化的單核/巨噬細胞產(chan) 生，能殺傷(shang) 和抑製腫瘤細胞，促進中性粒細胞吞噬，抗感染，引起發熱，誘導肝細胞急性期蛋白合成，促進髓樣白血病細胞向巨噬細胞分化，促進細胞增殖和分化，是重要的炎症因子，並參與(yu) 某些自身免疫病的病理損傷(shang) 。 

定義(yi) 2：一種由巨噬細胞對細菌感染或其他免疫源反應自然產(chan) 生的細胞因子。與(yu) 幹擾素協同作用可殺死腫瘤細胞。 

定義(yi) 3：主要由活化的單核/巨噬細胞產(chan) 生，能殺傷(shang) 和抑製腫瘤細胞的細胞因子。促進中性粒細胞吞噬，抗感染，引起發熱，誘導肝細胞急性期蛋白合成，促進髓樣白血病細胞向巨噬細胞分化，促進細胞增殖和分化，是重要的炎症介質，並參與(yu) 某些自身免疫病的病理損傷(shang) 。 

腫瘤壞死由巨噬細胞分泌的一種小分子蛋白。TNF-α主要由單核－巨噬細胞分泌；TNF-β主要由活化的T淋巴細胞分泌，兩(liang) 者有相似致熱性。小劑量呈單峰熱，大劑量呈雙峰熱；TNF在體(ti) 內(nei) 外均能刺激IL-1的產(chan) 生。不耐熱，70℃ 30min失活

簡介：

　　1975年Carswell等發現接種BCG的小鼠注射LPS後，血清中含有一種能殺傷(shang) 某些腫瘤細胞或使體(ti) 內(nei) 腫瘤組織發生血壞死的因子，稱為(wei) 腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor,TNF)。1985年Shalaby把巨噬細胞產(chan) 生的TNF命名為(wei) TNF-α，把T淋巴細胞產(chan) 生的淋巴毒素（lymphotoxin,LT)命名為(wei) TNF-β。TNF-α又稱惡質素。 

TNF的產(chan) 生：

（1）TNF-α是一種單核因子，主要由單核細胞和巨噬細胞產(chan) 生，LPS是較強的刺激劑。IFN-γ、M-CSF、GM-CSF對單核細胞/巨噬細胞產(chan) 生TNF-α有刺激作用，而PGE則有抑製作用。前單核細胞係U937、前髓細胞係HL-60在PMA刺激下可產(chan) 生較高水平的TNF-α。T淋巴細胞、T細胞雜交瘤、T淋巴樣細胞係以NK細胞等在PMA刺激下也可分泌TNF-α。SAC、PMA、抗IgM可刺激正常B細胞產(chan) 生TNF-α。此外，中性粒細胞、LAK、星狀細胞、內(nei) 皮細胞、平滑肌細胞亦可產(chan) 生TNF-α。 

（2）TNF-β是一種淋巴因子，抗原和絲(si) 裂原均可刺激T淋巴細胞分泌TNF-β。PMA刺激RPMI1788B淋巴母細胞可分泌高水平TNF-β。 

TNF的分子結構和基因：

（1）人的TNF-α基因長約2.76kb，小鼠為(wei) 2.78kb，結構非常相似，均由4個(ge) 外顯子和3個(ge) 內(nei) 含子組成，與(yu) MHC基因群密切連鎖，分別定位於(yu) 第6對和第17對染色體(ti) 上。1984年從(cong) HL-60、U937等細胞中克隆成功rHu TNF-α cDNA，並在大腸杆菌中獲得高表達。 人TNF-α前體(ti) 由233個(ge) 氨基酸殘基組成，含76個(ge) 氨基酸殘基的信號肽，切除信號肽後成熟型TNF-α為(wei) 157氨基酸殘基，非糖基化，第69位和101位兩(liang) 個(ge) 半胱氨酸形成分子內(nei) 二硫鍵。rHu TNF-α分子量為(wei) 17kDa。小鼠TNF-α前體(ti) 為(wei) 235氨基酸殘基，信號肽79氨基酸殘基，成熟的小鼠TNF-α（rMuTNF-α）分子量為(wei) 17kDa，由156個(ge) 氨基酸殘基組成，第69位和100位兩(liang) 個(ge) 半胱氨酸形成分子內(nei) 二硫鍵，有一個(ge) 糖基化點，但糖基化不影響其生物學功能。rHu TNF-α與(yu) rMu TNF-α有79%氨基酸組成同源性，TNF-α的生物學作用似無明顯的種屬特異性。zui近有人報道通過基因工程技術表達了N端少2個(ge) 氨基酸（Val、Arg）的155氨基酸人TNF-α，具有更好的生物學活性和抗腫瘤效應。此外，還有用基因工程方法，將TNF-α分子氨基端7個(ge) 氨基酸殘基缺失，再將8Pro、9Ser和10Asp改為(wei) 8Arg、9Lys和10Arg，或者再同時將157Leu改為(wei) 157Phe，改構後的TNF-α比天比天然TNF體(ti) 外殺傷(shang) L929細胞的活性增加1000倍左右，在體(ti) 內(nei) 腫瘤出血壞死效應也明顯增加。TNF-α和β發揮生物學效應的天然形式是同源的三聚體(ti) 。 

（2）人 和小鼠TNF-β基因分別定位於(yu) 第6和第17號染色體(ti) 。HuTNF-β分子由205個(ge) 氨基酸殘基組成，含34氨基酸殘基的信號肽，成熟型Hu TNF-β分子為(wei) 171個(ge) 氨基酸殘基，分子量25kDa。rHu TNF-β分子由202氨基酸殘基組成，包括33個(ge) 氨基酸殘基的信號肽，成熟分子169個(ge) 氨基酸殘基，與(yu) Hu TNF-β有79%的同源性。Hu TNF-β與(yu) Hu TNF-αDNA同源序列達56%，氨基酸水平上同源性為(wei) 36%。 

TNF的受體(ti) ：

（1）TNF-R的分型：

　　TNF-R可分為(wei) 兩(liang) 型：Ⅰ型TNF-R，55kDa，CD120a，439氨基酸殘基，此型受體(ti) 可能在溶細胞活性上起主要作用；Ⅱ型TNF-R，75kDa CD120b，426氨基酸殘基，此型受體(ti) 可能與(yu) 信號傳(chuan) 遞和T細胞增殖有關(guan) 。兩(liang) 型TNF-R均包括胞膜外區、穿膜區和胞漿區三個(ge) 部分，胞膜外區有28%的同源，但在有包漿區無同源性，可能與(yu) 介導不同的信號轉導途徑有關(guan) 。TNF-R屬於(yu) 神經生長因子受體(ti) （NGFR）超家族。TNF-α和TNF-β的受體(ti) 可能是同一的。TNF-R存在於(yu) 多種正常及腫瘤細胞表麵，一般每個(ge) 細胞受體(ti) 數目有103～104，如ME-180腫瘤細胞係TNF-αR約2000/個(ge) 細胞，Kd為(wei) 2*10-10M。不同細胞表麵TNF-αR的數目和親(qin) 和力似乎與(yu) 細胞對TNF-α的敏感性並不平行。TNF-α與(yu) 相應受體(ti) 結合後信號傳(chuan) 遞的機理尚不清楚，可能與(yu) 活化蛋白激酶C（PKC），催化受體(ti) 蛋白磷酸化有關(guan) 。 

（2）可溶性TNFR

TNF結合蛋白（TNF-BP）是TNFR的可溶性形式，有sTNf RⅠ（TNF-BPI）和sTNFRⅡ（TNF-BPⅡ）兩(liang) 種。一般認為(wei) sTNFR具有局限TNF活性，或穩定TNF的作用，在細胞因子網絡中有重要的調節作用。Seckiner 1988年發現發熱患者尿中有TNF抑製物，分子量為(wei) 33kDa。Olsson 1989年在慢性腎功不全患者血和尿中也發現有TNF-BP。TNF-BP可與(yu) TNF特異結合，抑製TNF活性，如抑製其細胞毒活性和誘導IL-1產(chan) 生，可促進皮下接種Meth A肉毒的生長，可見於(yu) 正常妊尿中。炎症、內(nei) 毒素血症、腦膜炎雙球菌感染、SLE、HIV感染、腎功不全時以及腫瘤時可升高。可溶性TNFR可有效地減輕佐劑性關(guan) 節炎的病理改變以及敗血症休克。 

TNF的生物學活性

TNF-α與(yu) TNF-β的生物學作用極為(wei) 相似，這可能與(yu) 分子結構的相似性和受體(ti) 的同一性有關(guan) 。但有某些生物學作用方麵也有不同之處。 

（1）殺傷(shang) 或抑製腫瘤細胞

　  TNF在體(ti) 內(nei) 、體(ti) 外均能殺死某些腫瘤細胞（cytolytic action)，或抑製增殖作用（cytostatic action）。腫瘤細胞株對TNF-α敏感性有很大的差異，TNF-α對極少數腫瘤細胞甚至有刺激作用。等處理腫瘤細胞（如小鼠成纖維細胞株L929）可明顯增強TNF-α殺傷(shang) 腫瘤細胞活性。體(ti) 內(nei) 腫瘤對TNF-α的反應也有很大的差異，與(yu) 其體(ti) 外細胞株對TNF-α的敏感性並不平行。同一細胞係可能有敏感株和抵抗株如L929-S和L929-R。此外，靶細胞內(nei) 源性TNF的表達可能會(hui) 使細胞抵抗外源性TNF的細胞毒作用，因此，通過誘導或抑製內(nei) 源性TNF的表達可改變細胞對外源性TNF的敏感性。巨噬細胞膜結合型TNF可能參與(yu) 對靶細胞的殺傷(shang) 作用。 

　　TNF殺傷(shang) 腫瘤的機理還不十分清楚，與(yu) 補體(ti) 或穿孔素（perforin)殺傷(shang) 細胞相比，TNF殺傷(shang) 細胞沒有穿孔現象，而且殺傷(shang) 過程相對比較緩慢。TNF殺傷(shang) 腫瘤組織細胞可能與(yu) 以下機理有關(guan) 。 

①、直接殺傷(shang) 或抑製作用：

TNF與(yu) 相應受體(ti) 結合後向細胞內(nei) 移，被靶細胞溶酶體(ti) 攝取導致溶酶體(ti) 穩定性降低，各種酶外泄，引起細胞溶解。也有認為(wei) TNFN激活磷脂酶A2，釋放超氧化物而引起DNA斷裂，磷脂酶A2抑製劑可降低TNF的抗病效應。TNF可或改變靶細胞糖代謝，使細胞內(nei) pH降低，導致細胞死亡。 

②、通過TNF對機體(ti) 免疫功能的調節作用，促進T細胞及其它殺傷(shang) 細胞對腫瘤細胞的殺傷(shang) 。 

③、TNF作用於(yu) 血管內(nei) 皮細胞，損傷(shang) 內(nei) 皮細胞或導致血管功能紊亂(luan) ，使血管損傷(shang) 和血栓形成，造成腫瘤組織的局部血流阻斷而發生出血、缺氧壞死。 

（2）提高中性粒細胞的吞噬能力

　　增加過氧化物陰離子產(chan) 生，增強ADCC功能，刺激細胞脫顆粒和分泌髓過氧化物酶。TNF預先與(yu) 內(nei) 皮細胞培養(yang) 可使其增加MHCⅠ類抗原、ICAM-1的表達，IL-1、GM-CSF和IL-8的分泌，並促進中性粒細胞粘附到內(nei) 皮細胞上，從(cong) 而刺激機體(ti) 局部炎症反應，TNF-α的這種誘導作用要比TNF-β為(wei) 強。TNF刺激單核細胞和巨噬細胞分泌IL-1，並調節NHCⅡ類抗原的表達。 

（3）抗感染

　　如抑製瘧原蟲生長，抑製病毒複製（如腺病毒Ⅱ型、皰疹病毒Ⅱ型），抑製病毒蛋白合成、病毒顆粒的產(chan) 生和感染性，並可殺傷(shang) 病毒感染細胞。TNF抗病毒機理不十分清楚。 

（4）TNF是一種內(nei) 源性熱原質

　　引起發熱，並誘導肝細胞急性期蛋白的合成。TNF引起發熱可能是通過直接刺激下丘腦體(ti) 溫調節中樞和刺激巨噬細胞釋放IL-1而引起，還可通過IL-1、TNF-α刺激其它細胞產(chan) 生IL-6。 

（5）促進髓樣白血病細胞向巨噬細胞分化

　　如促進髓樣白血病細胞ML-1、單核細胞白血病細胞U937、早幼粒白血病細胞HL60的分化，機理不清楚。TGF-β可抑製TNF-α多種生物學活性，但不抑製TNF-α對髓樣白血病細胞分化的誘導作用，甚至還有協同效應。 

（6）促進細胞增殖和分化

　　TNF促進T細胞NHCⅠ類抗原表達，增強IL-2依賴的胸腺細胞、T細胞增殖能力，促進IL-2、CSF和IFN-γ等淋巴因子產(chan) 生，增強有絲(si) 分裂原或外來抗原刺激B細胞的增殖和Ig分泌。TNF-α對某些腫瘤細胞具有生長因子樣作用，並協同EGF、PDGF和胰島素的促增殖作用，促進EGF受體(ti) 表達。TNF也可促進c-myc和c-fos等與(yu) 細胞增殖密切相關(guan) 原癌基因的表達，引起細胞周期由Go期向G1期轉變。zui近報道INF-β（LT）是EB病毒轉化淋巴母細胞的自分泌生長因子，抗LT抗體(ti) 、sTNf R以及TNF-α能抑製EB病毒轉化淋巴細胞的增殖。 

　　IL-1、IFN-γ和GM-CSF對TNF的生物學作用有明顯的增強作用，可能與(yu) 增加細胞TNF受體(ti) 的表達有關(guan) 。已報道一種抗TNF-α單克隆抗體(ti) ，可模擬TNF-α的某些生物學作用，這種現象在其它因子中還尚未見到。 

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