信帆生物推薦：免疫組化的方法的優點

信帆生物推薦：免疫組化的方法的優(you) 點

一、免疫組化技術的基本原理

應用免疫學及組織化學原理，對組織切片或細胞標本中的某些化學成分進行原位的定性、定位或定量研究，這種技術稱為(wei) 免疫組織化學技術或免疫細胞化學技術。

*，抗體(ti) 與(yu) 抗原之間的結合具有高度的特異性。免疫組化正是利用這一特性，即先將組織或細胞中的某些化學物質提取出來，以其作為(wei) 抗原或半抗原去免疫小鼠等實驗動物，製備特異性抗體(ti) ，再用這種抗體(ti) (*抗體(ti) )作為(wei) 抗原去免疫動物製備第二抗體(ti) ，並用某種酶(常用辣根過氧化物酶)或生物素等處理後再與(yu) 前述抗原成分結合，將抗原放大，由於(yu) 抗體(ti) 與(yu) 抗原結合後形成的免疫複合物是無色的，因此，還必須借助於(yu) 組織化學方法將抗原抗體(ti) 反應部位顯示出來(常用顯色劑DAB顯示為(wei) 棕黃色顆粒)。通過抗原抗體(ti) 反應及呈色反應，顯示細胞或組織中的化學成分，在顯微鏡下可清晰看見細胞內(nei) 發生的抗原抗體(ti) 反應產(chan) 物，從(cong) 而能夠在細胞或組織原位確定某些化學成分的分布、含量。組織或細胞中凡是能作抗原或半抗原的物質，如蛋白質、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體(ti) 、酶、激素、核酸及病原體(ti) 等都可用相應的特異性抗體(ti) 進行檢測。

二、免疫組織化學染色方法

1、按標記物質的種類，如熒光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶)、鐵蛋白、膠體(ti) 金等，可分為(wei) 免疫熒光法、放射免疫法、酶標法和免疫金銀法等。

2、按染色步驟可分為(wei) 直接法(又稱一步法)和間接法(二步、三步或多步法);與(yu) 直接法相比，間接法的靈敏度提高了許多。

3、按結合方式可分為(wei) 抗原—抗體(ti) 結合，如過氧化物酶-抗過氧化物酶(PAP)法和親(qin) 和連接，如卵白素-生物素-過氧化物酶複合物(ABC)法、鏈黴菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(SP)法等，其中SP法是zui常用的方法。

三、幾種常用免疫組織化學方法的原理

1、免疫熒光方法

是zui早建立的免疫組織化學技術。它利用抗原抗體(ti) 特異性結合的原理，先將已知抗體(ti) 標上熒光素，以此作為(wei) 探針檢查細胞或組織內(nei) 的相應抗原，在熒光顯微鏡下觀察。當抗原抗體(ti) 複合物中的熒光素受激發光的照射後即會(hui) 發出一定波長的熒光，從(cong) 而可確定組織中某種抗原的定位，進而還可進行定量分析。由於(yu) 免疫熒光技術特異性強、靈敏度高、快速簡便，所以在研究病理診斷、檢驗中應用比較廣。

2、免疫酶標方法

免疫酶標方法是繼免疫熒光後，於(yu) 60年代發展起來的技術。基本原理是先以酶標記的抗體(ti) 與(yu) 組織或細胞作用，然後加入酶的底物，生成有色的不溶性產(chan) 物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對細胞表麵和細胞內(nei) 的各種抗原成分進行定位研究。免疫酶標技術是目前zui常用的技術。

本方法與(yu) 免疫熒光技術相比的主要優(you) 點是：定位準確，對比度好，染色標本可長期保存，適合於(yu) 光、電鏡研究等。

免疫酶標方法的發展非常迅速，已經衍生出了多種標記方法，且隨著方法的不斷改進和創新，其特異性和靈敏度都在不斷提高，使用也越來越方便。目前在病理診斷中廣為(wei) 使用的當屬PAP法、ABC法、SP法等。

3、免疫膠體(ti) 金技術

免疫膠體(ti) 金技術是以膠體(ti) 金這樣一種特殊的金屬顆粒作為(wei) 標記物。膠體(ti) 金是指金的水溶膠，它能迅速而穩定地吸附蛋白，對蛋白的生物學活性則沒有明顯的影響。因此，用膠體(ti) 金標記一抗、二抗或其他能特異性結合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為(wei) 探針，就能對組織或細胞內(nei) 的抗原進行定性、定位，甚至定量研究。由於(yu) 膠體(ti) 金有不同大小的顆粒，且膠體(ti) 金的電子密度高，所以免疫膠體(ti) 金技術特別適合於(yu) 免疫電鏡的單標記或多標記定位研究。由於(yu) 膠體(ti) 金本身呈淡至深紅色，因此也適合進行光鏡觀察。如應用銀加強的免疫金銀法則更便於(yu) 光鏡觀察。

四、免疫組化技術的優(you) 點

1、特異性強 免疫學的基本原理決(jue) 定了抗原與(yu) 抗體(ti) 之間的結合具有高度特異性，因此，免疫組化從(cong) 理論上講也是組織細胞中抗原的特定顯示，如角蛋白(keratin)顯示上皮成分，LCA顯示淋巴細胞成分。隻有當組織細胞中存在交叉抗原時才會(hui) 出現交叉反應。

2、敏感性高 在應用免疫組化的起始階段，由於(yu) 技術上的限製，隻有直接法、間接法等敏感性不高的技術，那時的抗體(ti) 隻能稀釋幾倍、幾十倍;現在由於(yu) ABC法或SP法的出現，使抗體(ti) 稀釋上千倍、上萬(wan) 倍甚至上億(yi) 倍仍可在組織細胞中與(yu) 抗原結合，這樣高敏感性的抗體(ti) 抗原反應，使免疫組化方法越來越方便地應用於(yu) 常規病理診斷工作。

3、定位準確、形態與(yu) 功能相結合 該技術通過抗原抗體(ti) 反應及呈色反應，可在組織和細胞中進行抗原的準確定位，因而可同時對不同抗原在同一組織或細胞中進行定位觀察，這樣就可以進行形態與(yu) 功能相結合的研究，對病理學研究的深入是十分有意義(yi) 的。