信帆生物：Western Blot內參抗體選擇原則

信帆生物：Western Blot內(nei) 參抗體(ti) 選擇原則

內(nei) 參抗體(ti) 種類很多，比如β-actin、β-tubunlin、GAPDH、Lamin B等，那麽(me) 針對自己的實驗，我們(men) 該如何選擇呢?下麵簡單介紹下選擇內(nei) 參抗體(ti) 應遵循的原則：

一.樣本種屬來源：

首先要考慮的就是實驗樣本來源於(yu) 什麽(me) 物種。

1、哺乳動物的組織或者細胞樣本，通常選擇β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、Na,K atpase等。

2、植物來源實驗樣本，則可以選擇plant actin、Rubisco等。

3、其他來源樣本研究較少，所以就應該參照文獻報導，選擇合適的蛋白作為(wei) 內(nei) 參。

二.目的蛋白分子量：

選擇內(nei) 參抗體(ti) 時，應該考慮目的蛋白分子量的大小。通常應該保證目的蛋白與(yu) 內(nei) 參蛋白分子量相差5KD以上。比如目的蛋白分子量為(wei) 45KD，此時不適宜選擇β-actin作為(wei) 內(nei) 參，可以考慮選擇GAPDH或者β-tubulin作為(wei) 內(nei) 參。

三.目的蛋白表達部位：

就一般的蛋白檢測來說，β-actin、β-Tubulin抗體(ti) 等就可以了，而針對於(yu) 核蛋白的定量，特別是樣本蛋白就是核蛋白時，選擇恰當的核蛋白內(nei) 參則更能體(ti) 現內(nei) 部參照的價(jia) 值。常用的核內(nei) 參抗體(ti) 有Lamin A、Lamin B、Histone H3，除此之外，其它常見的核蛋白內(nei) 參還有PCNA、K70、K80等，在一些文獻報道中，Erk2、TATA binding protein(TBP)以及c-Jun、c-Fos等都有使用。而對於(yu) 膜蛋白檢測，常用的內(nei) 參抗體(ti) 為(wei) Na,K ATPase。對於(yu) 線粒體(ti) 蛋白的檢測，常用VDAC1和COX IV作為(wei) 內(nei) 參抗體(ti) 。

以上幾條原則隻是針對通常情況，但是需要注意的問題是——內(nei) 參的選擇需要考慮實際的試驗環境，比如某些細胞中，由於(yu) 組織缺氧、糖尿病等因素會(hui) 導致GAPDH的表達增高，不適合做內(nei) 參。比如在涉及細胞增殖相關(guan) 試驗中，c-Jun由於(yu) 自身表達變化就不適合做內(nei) 參;而在凋亡實驗時，TBP、Lamin等也不適合作為(wei) 內(nei) 參。因此設計實驗方案的時候應該考慮這些因素並查詢相應文獻，在實驗過程中也應該注意如果內(nei) 參表達出現異常，應考慮這方麵因素。