RIPA裂解液的詳細介紹，RIPA裂解液*

RIPA 裂解緩衝(chong) 液 (RIPA Lysis Buffer)

描述： RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer)對動物細胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強裂解作用，是經 典和zui常用的細胞組織快速裂解液。使用 RIPA Buffer 製備用於(yu)  Western 特別是用於(yu) 免疫共沉澱的 裂解產(chan) 物已經是一種首選的標準操作，也適用於(yu) 大部分抗原表位的檢測，特別是免疫共沉澱等實驗。

組成： 100 ml RIPA Buffer：50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.1% SDS.

儲(chu) 存：4  ℃保存 製備細胞裂解產(chan) 物

1. 800g 4℃離心 5 分鍾收集培養(yang) 細胞，估計細胞離心後的體(ti) 積（PCV, 106 cells=~20 ml, 107 cells

=~100 ml PCV）；

2. 每 50～100 ml PCV 加入 5 倍體(ti) 積 RIPA 裂解緩衝(chong) 液（250~500 ml）,冰浴放置 10 分鍾，並每隔

5 分鍾在漩渦混合儀(yi) 上振蕩 30 秒；

3. 12000g 4℃離心 10 分鍾，將上清轉移到新的離心管中，即得細胞總蛋白產(chan) 物；

 注意：假如所得蛋白產(chan) 物較為(wei) 粘稠，可先 95℃加熱 5 分鍾，迅速冰浴 5 分鍾，然後再進行步驟 3

製備組織裂解產(chan) 物

1. 取 50-100 mg 組織在冰上剪成碎片，用預冷的 PBS 洗滌 2 次離心棄去 PBS；

2. 加入 0.5-1 ml 預冷 RIPA 裂解緩衝(chong) 液；

3. 4℃用玻璃勻漿器勻漿 20-40 次，直到 95％的細胞被破碎，然後在冰浴中放置 10 分鍾，並每隔

5 分鍾在漩渦混合儀(yi) 上振蕩 30 秒；

4. 12000g 4℃離心 10 分鍾，將上清轉移到新的離心管中，即得組織總蛋白產(chan) 物；

 注意：假如所得蛋白產(chan) 物較為(wei) 粘稠，可先 95℃加熱 5 分鍾，迅速冰浴 5 分鍾，然後再進行步驟 4

說明：

1. 在轉移上清液時不要吸入底部的沉澱物；

2. 在做免疫沉澱或免疫共沉澱時在實驗前進行蛋白的提取，以避免某些不穩定蛋白的降解；

3. 在該 RIPA 裂解緩衝(chong) 液中未加入蛋白酶抑製劑，用戶可自行選擇添加。