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更新時間:2015-09-09
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大分子抗原因其具有兩(liang) 個(ge) 以上的抗原決(jue) 定簇,而可用雙抗體(ti) 夾心法測定,小分子半抗原如地高辛、茶堿等藥物以及T3,T4及睾酮等激素因其隻有一個(ge) 抗原決(jue) 定簇,從(cong) 而無法使用雙抗夾心方法測定,隻能采用競爭(zheng) 抑製法測定。具體(ti) 步驟如下:
1.先用抗小分子的特異抗體(ti) 如雙抗體(ti) 夾心法一樣包被固相並封閉。
2.同時加入待測樣本和酶標的小分子,溫育一定時間後洗板;此步中,待測樣本的小分子將與(yu) 酶標小分子競爭(zheng) 與(yu) 固相上特異抗體(ti) 結合。
3.加入酶底物,溫育顯色測定,顯色的強弱與(yu) 待測樣本中的小分子含量成反比(圖2—4)。
這種測定模式中,需要得到小分子與(yu) 酶的結合物,而小分子酶結合物一則在製備上不如抗體(ti) 酶結合物簡便,二則其純化亦頗為(wei) 困難,結合有小分子的酶與(yu) 遊離酶之間難於(yu) 分離。因此,有人嚐試在合成二或多聚體(ti) 小分子的基礎上,建立雙抗夾心競爭(zheng) ELISA方法測定小分子,測定的靈敏度和特異性均有所提高(圖2—5)。
