上海信帆生物為大家提供：ELISA實驗中細胞樣本的收集方法

很多客戶在做ELISA實驗的時候，樣本是細胞樣本，大家對如何處理這個(ge) 細胞樣本，都各有一套方法，今天上海信帆生物就把自己總結的一套方法分享給大家，希望有所幫助。

對於(yu) 培養(yang) 細胞樣品：

1. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鍾內(nei) 加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為(wei) 1mM。

2. 對於(yu) 貼壁細胞：去除培養(yang) 液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yang) 液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有幹擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒後，細胞就會(hui) 被裂解。

對於(yu) 懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解後應沒有明顯的細胞沉澱。如果細胞量較多，必需分裝成50-100萬(wan) 細胞/管，然後再裂解。

3. 充分裂解後，10000-14000g離心3-5分鍾，取上清，即可進行後續的PAGE、Western和免疫沉澱等操作。

裂解液用量說明：通常6孔板每孔細胞加入150微升裂解液已經足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200微升或250微升。

注：RIPA裂解液的裂解產(chan) 物中經常會(hui) 出現一小團透明膠狀物，屬正常現象。該透明膠狀物為(wei) 含有基因組DNA等的複合物。在不檢測和基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用於(yu) 後續實驗；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨後離心取上清用於(yu) 後續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子，例如NF-kappaB、p53等時，通常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉錄因子。

如果大家還有還有不清楚的地方，歡迎隨時谘詢。另外上海信帆生物還可以提供ELISA免費代測服務，歡迎。

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