​明膠酶譜試劑盒文獻上新啦

明膠酶譜試劑盒文獻上新啦

標題《組織基質金屬蛋白酶抑製劑-2的表達純化及活性鑒定》

摘要：組織基質金屬蛋白酶抑製劑-2 (TIMP-2)抑製腫瘤遷移及侵襲。文中以人TIMP-2為(wei) 研究對象，探索人TIMP-2蛋白的原核表達特征，並進行純化及活性鑒定。以人肺癌A549細胞的總RNA反轉錄得到的cDNA為(wei) 模板，克隆人TIMP-2基因，構建pET28a重組表達載體(ti) ；經酶切檢測和測序分析的重組表達載體(ti) pET28a-TIMP-2轉入大腸杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中，利用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導表達，並對表達條件進行優(you) 化。經鎳親(qin) 和柱純化後，用Western blotting法鑒定融合蛋白His-TIMP-2，並用明膠酶譜法檢測融合蛋白的活性。研究發現融合蛋白His-TIMP-2在E. coli BL21(DE3)中以包涵體(ti) 的形式存在；在一定範圍內(nei) ，IPTG濃度對His-TIMP-2的表達量沒有顯著影響；而在該表達係統中，誘導溫度和時間是關(guan) 鍵參數，His-TIMP-2的表達量隨誘導溫度升高而增加；純化並複性後的融合蛋白His-TIMP-2能有效抑製人肺癌A549細胞表達的基質金屬蛋白酶的活性。具有活性的融合蛋白的獲得為(wei) 後續深入研究人TIMP-2的功能及機製奠定基礎，並對腫瘤治療具有重要意義(yi) 。