ky体育在线登陆科研成果--胸膜肺炎放線杆菌的分離鑒定

    胸膜肺炎放線杆菌是引起豬傳(chuan) 染性胸膜肺炎的病原，給養(yang) 豬業(ye) 帶來嚴(yan) 重的經濟損失。目前共有15個(ge) 血清型，該病原菌的主要毒力因子包括CPS、LPS、OMP、TBP、粘附因子、內(nei) 毒素、尿素酶等。Apx毒素是APPzui主要的毒力因子，現證明不同血清型的菌株可產(chan) 生4種Apx，ApxⅡ除血清型10和14以外，其它血清型都分泌；任何血清型都能在體(ti) 內(nei) 分泌毒素蛋白ApxⅣ，但體(ti) 外培養(yang) 的細菌卻不能分泌該毒素。

    本研究包括如下三方麵的內(nei) 容：

    1．胸膜肺炎放線杆菌的分離鑒定 將病料接種培養(yang) 基，經過24小時的培養(yang) 後將細菌進行純化，挑單菌落革蘭(lan) 氏染色、鏡檢，將細菌接種到細菌鑒定微量反應管，同時以細菌製備模板，做apxⅣ-PCR，然後經過瓊脂擴散試驗確定血清型。結果從(cong) 患病豬的肺、關(guan) 節分離到胸膜肺炎放線杆菌6株，其中，4株4型，1株3型，1株未定型。

    2．胸膜肺炎放線杆菌ApxⅡ-ELISA抗體(ti) 檢測試劑盒的研製及其應用 根據ApxⅡ的特點，實驗室已經建立了一種能夠監測疫苗免疫後的抗體(ti) 水平和對疫苗免疫效果進行評估的血清學方法ApxⅡ-ELISA；本研究將該診斷方法進一步研製成試劑盒，對其特異性、敏感性、重複性和穩定性進行了測試，與(yu) 間接血凝試驗試劑盒進行了對比研究，並用該試劑盒檢測了來自中國、美國、加拿大、丹麥、澳大利亞(ya) 和英國的研究豬血清1453份，同時也製作了ApxⅡ的抗體(ti) 削長規律曲線 結果表明ApxⅡ-ky体育在线登陆具有很高的特異性和敏感性；三批試劑盒的批內(nei) 和批間的重複性良好（變異係數均＜15％）；試劑盒在2～8℃保存9個(ge) 月內(nei) 穩定性良好；檢測來自中國、美國、加拿大、丹麥、澳大利亞(ya) 和英國的研究豬血清的陽性率分別為(wei) 49.56％、85.51％、1.92％、73.33％、1.85％和100％。從(cong) ApxⅡ抗體(ti) 消長規律的曲線可以看出，疫苗免疫後3周或者4周就可以監測到ApxⅡ抗體(ti) ，抗體(ti) 水平達到峰值時，其值為(wei) 1∶1280。ApxⅡ-ky体育在线登陆能夠有效的診斷豬傳(chuan) 染性胸膜肺炎，同時也可作為(wei) 一種評價(jia) 豬群免疫後免疫效果的有效方法；            

3．胸膜肺炎放線杆菌ApxⅣ-ELISA抗體(ti) 檢測試劑盒的研製及其應用 根據ApxⅣ的特點，實驗室已經建立了一種能夠特異性的診斷豬傳(chuan) 染性胸膜肺炎，並且能夠有效的區分感染豬與(yu) 免疫豬的鑒別診斷方法ApxⅣ-ELISA。本研究將該診斷方法進一步研製成試劑盒，對其特異性、敏感性、重複性和穩定性進行了測試，與(yu) 間接血凝試驗及IDEXX公司的CHEKIT-APP-APXⅣ試劑盒進行了對比研究，並用該試劑盒檢測了來自中國、美國、加拿大、丹麥、澳大利亞(ya) 和英國的研究豬血清1453份，同時也製作了ApxⅣ的抗體(ti) 削長規律曲線。 結果表明ApxⅣ-ky体育在线登陆具有很高的特異性和敏感性，與(yu) CHEKIT-APP-APXⅣ試劑盒的檢測符合率為(wei) 91.37％；三批試劑盒的批內(nei) 和批間的重複性良好（變異係數均＜15％）；試劑盒在2～8℃保存9個(ge) 月內(nei) 穩定性良好；App感染後3周或者4周就可以監測到ApxⅣ抗體(ti) ，抗體(ti) 水平達到峰值時，其值為(wei) 1∶640。檢測來自中國、美國、加拿大、丹麥、澳大利亞(ya) 和英國的研究豬血清的陽性率分別為(wei) 22.30％、39.72％、0.64％、42.22％、1.85％和93.94％。ApxⅣ-ky体育在线登陆能夠有效區分APP感染豬與(yu) 三價(jia) 滅活疫苗或亞(ya) 單位疫苗免疫豬。

   目前，胸膜肺炎放線杆菌比較難以分離，其原因有待進一步研究。本研究分離出6株APP地方分離株，對我國豬傳(chuan) 染性胸膜肺炎的病原學與(yu) 流行病學研究積累了一定的菌株資源。同時，對ApxⅡ-ELISA和ApxⅣ-ELISA兩(liang) 種抗體(ti) 檢測試劑盒進行了產(chan) 業(ye) 化研究，其中ApxⅣ-ELISA達到研究應用水平，對豬傳(chuan) 染性胸膜肺炎的診斷與(yu) 防控具有十分重要的意義(yi) 。（轉自 論文網）