PRODUCT CLASSIFICATION
產品分類產(chan) 品簡介:
本產(chan) 品是一種用於(yu) 分離人外周血單個(ge) 核細胞的無菌、低內(nei) 毒素水平的密度梯度分離液。外周血中單個(ge) 核細胞(PBMC)包括淋巴細胞和單核細胞。其體(ti) 積、形態和密度與(yu) 其他細胞不同,紅細胞和粒細胞密度較大,為(wei) 1.090 g/mL 左右,淋巴細胞和單核細胞密度為(wei) 1.075~1.090 g/mL,血小板為(wei) 1.030~1.035 g/mL。為(wei) 此利用一種密度介於(yu) 1.075~1.092 之間而近於(yu) 等滲的溶液做密度梯度離心,使一定密度的細胞按相應密度梯度分布,從(cong) 而將各種血細胞加以分離。
產(chan) 品名稱:人全血單個(ge) 核細胞分離液(FICOLL 配製)
貨號:XF9011
規格:200ml
密度:1.077
儲(chu) 存條件:室溫避光
有效期:12個(ge) 月
產(chan) 品指標:
密度 1.077±0.001g/mL
滲透壓 290~350 mOsm/kg H2O
無菌 0.1μm 濾膜過濾。
操作步驟:
1. 取新鮮抗凝全血(EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可)或者去纖維蛋白血液,用等體(ti) 積的全血及組織稀釋液或者 PBS 稀釋全血。
2. 在離心管中加入適量分離液(當稀釋後血液體(ti) 積小於(yu) 3mL 時,加入3mL 分離液;大於(yu) 等於(yu) 3mL,加入等體(ti) 積分離液。但二者的總體(ti) 積不能超過離心管的三分之二,否則會(hui) 影響分離效果),將稀釋後的血液平鋪到分離液液麵上方,注意保持兩(liang) 液麵界麵清晰。(可以使用巴氏德吸管吸取血液,然後將血液小心的平鋪於(yu) 分離液上,因為(wei) 兩(liang) 者的密度差異,將形成明顯的分層界麵。如果樣品較多加樣時間較長,在離心之前出現紅細胞成團下沉屬正常現象。)
3. 室溫,水平轉子 500~1000g,離心 20~30min(血
液的體(ti) 積越大所需的離心力越大,離心時間越
長,最佳的分離條件需摸索,離心轉速最大不
超過 1200g)。
4. 離心後將出現明顯的分層:最上層是稀釋的
血漿層,中間是透明的分離液層,血漿與(yu) 分離液
之間的白膜層即為(wei) 單個(ge) 核細胞層,離心管底部
是紅細胞與(yu) 粒細胞。
5. 小心的吸取白膜層細胞到 15mL 潔淨的離心管
中, 10mL PBS 或細胞洗滌液洗滌白膜層細
胞。250g,離心 10min。
6. 棄上清,5mL 的 PBS 或細胞清洗液重懸細胞,250g,離心 10min。
7. 重複步驟 6。
8. 棄上清,細胞重懸備用。
注意事項:
1、本產(chan) 品僅(jin) 供科研實驗用,不做其他用途。
2、為(wei) 了您的安全與(yu) 健康,使用時請穿實驗服並佩戴一次性手套。