人全血單個核細胞分離液使用操作說明

產(chan) 品簡介：

本產(chan) 品是一種用於(yu) 分離人外周血單個(ge) 核細胞的無菌、低內(nei) 毒素水平的密度梯度分離液。外周血中單個(ge) 核細胞（PBMC）包括淋巴細胞和單核細胞。其體(ti) 積、形態和密度與(yu) 其他細胞不同，紅細胞和粒細胞密度較大，為(wei) 1.090 g/mL 左右，淋巴細胞和單核細胞密度為(wei) 1.075~1.090 g/mL，血小板為(wei) 1.030~1.035 g/mL。為(wei) 此利用一種密度介於(yu) 1.075～1.092 之間而近於(yu) 等滲的溶液做密度梯度離心，使一定密度的細胞按相應密度梯度分布，從(cong) 而將各種血細胞加以分離。

產(chan) 品名稱：人全血單個(ge) 核細胞分離液（FICOLL 配製）

貨號：XF9011

規格：200ml

密度：1.077 

儲(chu) 存條件：室溫避光

有效期：12個(ge) 月

產(chan) 品指標：

密度               1.077±0.001g/mL

滲透壓             290~350 mOsm/kg H2O

無菌               0.1μm 濾膜過濾。

操作步驟：

1. 取新鮮抗凝全血（EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可）或者去纖維蛋白血液，用等體(ti) 積的全血及組織稀釋液或者 PBS 稀釋全血。

2. 在離心管中加入適量分離液（當稀釋後血液體(ti) 積小於(yu) 3mL 時，加入3mL 分離液；大於(yu) 等於(yu) 3mL，加入等體(ti) 積分離液。但二者的總體(ti) 積不能超過離心管的三分之二，否則會(hui) 影響分離效果），將稀釋後的血液平鋪到分離液液麵上方，注意保持兩(liang) 液麵界麵清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然後將血液小心的平鋪於(yu) 分離液上，因為(wei) 兩(liang) 者的密度差異，將形成明顯的分層界麵。如果樣品較多加樣時間較長，在離心之前出現紅細胞成團下沉屬正常現象。）

3. 室溫，水平轉子 500~1000g，離心 20~30min（血

液的體(ti) 積越大所需的離心力越大，離心時間越   

長，最佳的分離條件需摸索，離心轉速最大不    

超過 1200g）。                      

4. 離心後將出現明顯的分層：最上層是稀釋的    

血漿層，中間是透明的分離液層，血漿與(yu) 分離液

之間的白膜層即為(wei) 單個(ge) 核細胞層，離心管底部

是紅細胞與(yu) 粒細胞。

5. 小心的吸取白膜層細胞到 15mL 潔淨的離心管

中， 10mL PBS 或細胞洗滌液洗滌白膜層細

胞。250g，離心 10min。

6. 棄上清，5mL 的 PBS 或細胞清洗液重懸細胞，250g，離心 10min。

7. 重複步驟 6。

8. 棄上清，細胞重懸備用。

注意事項：

1、本產(chan) 品僅(jin) 供科研實驗用，不做其他用途。

2、為(wei) 了您的安全與(yu) 健康，使用時請穿實驗服並佩戴一次性手套。