IP類實驗代測的介紹

IP類實驗代測的介紹

免疫共沉澱(Co-IP 蛋白與(yu) 蛋白)

免疫共沉澱（Co-Immunoprecipitation）是以抗體(ti) 和抗原之間的專(zhuan) 一性作用為(wei) 基礎的用於(yu) 研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩(liang) 種蛋白質在完整細胞內(nei) 生理性相互作用的有效方法。 當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內(nei) 存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。當用預先固化在agarose beads上的蛋白質A的抗體(ti) 免疫沉澱A蛋白，那麽(me) 與(yu) A蛋白在體(ti) 內(nei) 結合的蛋白質B也能一起沉澱下來。再通過蛋白變性分離，對B蛋白進行檢測，進而證明兩(liang) 者間的相互作用。 這種方法得到的目的蛋白是在細胞內(nei) 與(yu) 興(xing) 趣蛋白天然結合的，符合體(ti) 內(nei) 實際情況，得到的結果可信度高。這種方法常用於(yu) 測定兩(liang) 種目標蛋白質是否在體(ti) 內(nei) 結合；也可用於(yu) 確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔。

CHIP實驗（DNA-蛋白相互作用）
染色質免疫沉澱技術的原理是：在生理狀態下把細胞內(nei) 的DNA與(yu) 蛋白質交聯在一起，通過超聲或酶處理將染色質切為(wei) 小片段後，利用抗原抗體(ti) 的特異性識別反應，將與(yu) 目的蛋白相結合的DNA片段沉澱下來。染色質免疫沉澱技術一般包括細胞固定，染色質斷裂，染色質免疫沉澱，交聯反應的逆轉，DNA的純化，以及DNA的鑒定。因為(wei) ChIP實驗涉及的步驟多，結果的重複性較低，所以對ChIP實驗過程的每一步都應設計相應的對照，而且對結果的分析也需要有一定的經驗。對於(yu) 剛剛開始使用ChIP技術的研究人員來說，使用成熟的商品化試劑盒和相關(guan) 的技術服務會(hui) 達到事半功倍的效果。

Clip實驗（RNA-蛋白相互作用）
核小體(ti) 組蛋白可以發生多種翻譯後的共價(jia) 修飾，如乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化等，這些共價(jia) 修飾與(yu) 真核基因的表達密切相關(guan) 。根據“組蛋白密碼"假說，組蛋白的各種共價(jia) 修飾的組合會(hui) 以協同或拮抗的方式誘導特異的下遊生物學功能，因此，ChIP也為(wei) 研究組蛋白修飾在基因表達中的作用，全麵闡明真核基因的表達調控機製提供了強有力的研究工具。
該技術主要應用於(yu) ：
1.組蛋白修飾酶的抗體(ti) 作為(wei) “生物標記"
2.轉錄調控分析
3.藥物開發研究
4.有絲(si) 分裂研究
5.DNA損失與(yu) 凋亡分析

RIP技術（RNA結合蛋白免疫沉澱）
RIP這種新興(xing) 的技術運用針對目標蛋白的抗體(ti) 把相應的RNA-蛋白複合物沉澱下來，然後經過分離純化就可以對結合在複合物上的RNA進行分析。RIP可以看成是普遍使用的染色質免疫沉澱ChIP技術的類似應用，但由於(yu) 研究對象是RNA-蛋白複合物而不是DNA-蛋白複合物，RIP實驗的優(you) 化條件與(yu) ChIP實驗不太相同（如複合物不需要固定，RIP反應體(ti) 係中的試劑和抗體(ti) 絕對不能含有RNA酶，抗體(ti) 需經RIP實驗驗證等等）。RIP技術下遊結合microarray技術被稱為(wei) RIP-Chip，幫助我們(men) 更高通量地了解癌症以及其它疾病整體(ti) 水平的RNA變化。
RIP 實驗基本原理： 1. 用抗體(ti) 或表位標記物捕獲細胞核內(nei) 或細胞質中內(nei) 源性的RNA結合蛋白。 2. 防止非特異性的RNA的結合。 3. 免疫沉澱把RNA結合蛋白及其結合的RNA一起分離出來。 4.結合的RNA序列通過microarray（RIP-Chip），定量RT-PCR或高通量測序（RIP-Seq）方法來鑒定。 延伸閱讀：95%的人類基因組並不編碼基因，而是產(chan) 生大量的非編碼RNA,真正編碼蛋白質的基因隻占人類總基因組的約2%。這些非編碼RNA在生命的生長發育的各個(ge) 階段都發揮著重要的調節作用，與(yu) 艾滋病、白血病、糖尿病、畸形等多種病變密切相關(guan) ，並且參與(yu) 著幹細胞和表觀遺傳(chuan) 學調控。

MeRIP-PCR（m6A RNA甲基化）
MeRIP-Seq (methylated RNA immunoprecipitation sequencing)結合RNA-蛋白免疫共沉澱和高通量測序技術，可實現全轉錄組水平上RNA甲基化分析。由於(yu) 甲基化修飾約占所有RNA修飾的60% 以上，而N6-甲基腺嘌呤（N6-methyladenosine，m6A），作為(wei) 最常見的一種轉錄後修飾，介導了超過80%的RNA甲基化。基於(yu) MeRIP-Seq分析RNA甲基化模式，加速了癌症發生和轉移、胚胎發育、脂類代謝、環狀RNA翻譯和DNA損傷(shang) 修複等生物學功能和作用機製的研究。

服務類型如下：
免疫共沉澱(Co-IP 蛋白與(yu) 蛋白)
CHIP實驗（DNA-蛋白相互作用）
RIP技術（RNA結合蛋白免疫沉澱）
Clip實驗（RNA-蛋白相互作用）
MeRIP-PCR（m6A RNA甲基化）

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