丙酮酸脫羧酶（PDC）測試盒的操作步驟

丙酮酸脫羧酶（PDC）測試盒的操作步驟

（Pyruvate Decarboxylase Kit，PDC 分光光度法）

一、測定原理：

PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛，添加乙醇脫氫酶

（ADH）來進一步催化NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+；

NADH 在340nm有吸收峰，而NAD+沒有；通過測定340nm

光吸收下降速率，來計算PDC 活性。

二、測定意義(yi) ：

PDC主要存在於(yu) 酵母中，是乙醇發酵的關(guan) 鍵酶之一，催

化丙酮酸脫羧生成乙醛。

三、自備儀(yi) 器或用品：

研缽、冰、台式離心機、紫外分光光度計、1mL石英比

色皿、可調式移液槍和蒸餾水。

四、試劑盒組成(50T/48 樣)：

試劑一：液體(ti) ×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體(ti) ×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體(ti) ×1 瓶，4℃保存。

試劑四：粉劑×1 瓶，﹣20℃保存。

試劑五：液體(ti) ×1 瓶，﹣20℃保存。

混合試劑：臨(lin) 用前配製，小心把試劑四和五轉移到試劑三中，

充分溶解。

試劑六：液體(ti) ×1 瓶，4℃保存。

五、粗酶液提取:

1、細菌或細胞處理：收集細菌或細胞到離心管內(nei) ，離心後

棄上清；按照每200 萬(wan) 細菌或細胞加入400μL提取

液，超聲波破碎細菌或細胞（功率200W，工作3s，

間歇10s，工作35次），16000g 4℃離心20min，取上

清，置冰上待測。

2、組織處理：按照組織質量（g）:提取液體(ti) 積(mL)為(wei) 1：5～

10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）

進行冰浴勻漿，16000g 4℃離心20min，取上清，置

冰上待測。

3、血清（漿）樣品：直接檢測

六、操作步驟:

注：ε：NADH 摩爾消光係數，6.22×10 3L/mol/cm；

d：比色皿光徑，1cm；

V 總：反應體(ti) 係總體(ti) 積，1mL=0.001 L；

V 樣：加入反應體(ti) 係中上清液體(ti) 積，0.1mL；

Cpr：蛋白濃度，mg/mL（需要另外測定，建議使用本

公司BCA蛋白質含量試劑盒）；

W：樣本質量，g；

V 樣總：加入提取液體(ti) ，1mL；

細胞數：細胞總數量，10 4個(ge) ；

T：反應時間，1 min。

丙酮酸脫羧酶（PDC）測試盒的操作步驟