ATP 含量測試盒的測定原理

ATP 含量測試盒的測定原理

（100 管/48 樣）

一、檢測意義(yi) ：

三磷酸腺苷（adenosine 5'-triphosphate，ATP）是生物體(ti) 內(nei) 能量轉換最基本的載體(ti) , 其含量的變化直接關(guan) 係到各器官的能量代謝。ATP 作為(wei) 最重要的能量分子在細胞的各種生理、病理過程中起著重要作用。ATP 水平的改變，會(hui) 影響許多細胞的功能。通常細胞在凋亡、壞死或處於(yu) 一些毒性狀態下，ATP 水平會(hui) 下降，而高葡萄糖刺激等對於(yu) 一些細胞可以上調細胞內(nei) ATP 水平。通常ATP 水平的下降表明線粒體(ti) 的功能受損或下降，在細胞凋亡時 ATP 水平的下降通常和線粒體(ti) 的膜電位下降同時發生狀態。ATP 含量測定試劑盒可以用於(yu) 檢測紅細胞或組織內(nei) 的 ATP 水平。

二、測定原理：

肌酸激酶催化三磷酸腺苷和肌酸，生成磷酸肌酸，用磷鉬酸比色法進行檢測。

三、試劑組成及配製：（100 管/48 樣）（本試劑盒附送雙蒸水一瓶，供客戶配試劑時使用）

[注]：本試劑盒中 ATP3# 粉劑-20℃冷凍保存，其餘(yu) 試劑 4℃保存，有效期 3 個(ge) 月，開封後有效期為(wei) 1 個(ge) 月。

四、樣本前處理：

1、紅細胞：抗凝全血取下層壓積紅細胞，一般按 1：4 的體(ti) 積比加雙蒸水進行稀釋，再混勻使溶血，製備成溶血液。將製好的溶血液加入玻璃試管中沸水加熱煮 10分鍾，取出混勻抽提 1 分鍾，4000 轉/分鍾離心 10 分鍾，取上清液待測。

2、組織樣本：準確稱取組織重，按重量（g）：體(ti) 積（ml）=1：9 的比例，加入 9 倍體(ti) 積的冷雙蒸水，冰水浴勻漿, 製成 10%的勻漿液(取出部分 3500 轉/分離心 10 分鍾,取上清測定蛋白濃度)，再置於(yu) 沸水浴中煮 10 分鍾，取出混勻抽提 1 分鍾，3500 轉/分離心 10 分鍾，取上清液待

測。

3、培養(yang) 細胞：先離心處理將細胞與(yu) 培養(yang) 上清分離，除去培養(yang) 上清，得到下層沉澱細胞（一般細胞數量達到 106），將收集好的細胞加入 300～500μL 冷雙蒸水，置於(yu) 冰水浴中勻漿破碎(取出部分測定蛋白濃度)，後將細胞懸液於(yu) 沸水浴中加熱 10 分鍾，取出混勻抽提 1 分鍾，即可用於(yu) 測定。[注]：混勻抽提 1 分鍾即為(wei) 漩渦混勻 1 分鍾。

五、操作步驟：

ATP 含量測試盒的測定原理